两步水解酶法制备大豆异黄酮苷元初探.pdfVIP

2011年2月 中国粮油学报 V01．26．No．2 OilsAssociation Feb．2011 第26卷第2期 JoumaloftIleChineseCerealsand 两步水解酶法制备大豆异黄酮苷元初探 钱丽丽1 左 锋1 张爱武1 张永忠2’3 (黑龙江八一农垦大学食品学院1，大庆163319) (东北农业大学理学院2，哈尔滨150030) (国家教育部大豆生物学重点实验室3，哈尔滨150030) 摘要利用二步水解法制备大豆异黄酮苷元。经弱碱水解丙二酰基大豆异黄酮为糖苷型大豆异黄酮， 再经果胶酶进一步水解获得富含苷元的大豆异黄酮。采用单因素试验和正交试验，得到果胶酶制备大豆异黄 酮苷元的较优工艺条件：果胶酶水解时间20 O．80％。苷元水解得率为87．37％。 关键词果胶酶染料木黄酮黄豆苷元 中图分类号：倪18 文献标识码：A 文章编号：1003一0174(2011)02—0014—04 随着人类对大豆异黄酮的生物学意义的不断研 究，大豆异黄酮苷元的生理作用¨。1和人体吸收形式 sigIIla公司。果胶酶：杰诺生物酶有限公司(经测定 更加明确化，从而国内学者越来越多关注大豆异黄 812 酶比活力为：29 U／mg)。豆粕(东农32)：东北农 酮苷元制备的研究，目前已见研究中的葡萄糖苷酶 业大学赠送。30％大豆异黄酮粉：哈高科赠送。试 水解制备苷元研究【4。J，但由于此种酶尚未商业化， 验所用甲醇为色谱级，其余试剂为分析纯。 因此制约了大豆异黄酮苷元制备的工业化，试验首 Cx一500型超声波清洗机：北京医疗设备二厂； 次应用果胶酶水解糖苷型大豆异黄酮制备大豆异黄 LGlO一2．4A型高速离心机：北京医用离心机厂；H． 酮苷元。大豆中的大豆异黄酮主要以糖苷形式存在， H．S21—2R型电热恒温水浴锅：上海医疗器械五 其中丙二酰基型大豆异黄酮占总的大豆异黄酮含量的 60％之多。因此制备富含苷元形式的大豆异黄酮需要 安高效液相色谱仪：美国戴安公司。 对糖苷形式的大豆异黄酮进行水解。水解分为两步， 1．2方法 第一步是将丙二酰基型大豆异黄酮水解转化为葡萄糖 1．2．1大豆异黄酮含量测定 苷型大豆异黄酮，第二步是将葡萄糖苷型大豆异黄酮 高效液相分析条件： 水解成大豆异黄酮苷元：以最大限度获得高含量的大 流动相：甲醇：乙酸(0．5％)=40：60(体积比)， 豆异黄酮苷元。对丙二酰基型大豆异黄酮水解制备葡 色谱柱：NoYa—Pak 萄糖苷型大豆异黄酮已进行研究MJ，而对于糖苷型到 流速：1．0mL／min，检测波长：254nm，进样量： 苷元型大豆异黄酮的转化采取果胶酶水解法制备大豆 10斗L。 异黄酮苷元，试验在前期的基础上进行第二步酶水解 根据标准品染料木黄酮、黄豆苷元、染料木苷和 法，通过单因素和正交试验确定较优工艺条件，最大限 黄豆苷各自性质不同，经紫外检测器测定，样品与标 度获得富含苷元大豆异黄酮，为解决酶法制备高活性 准品比较，以保留时间定性、峰面积定量、外标法计 大豆异黄酮的工业化提供理论依据。 算。