课件：霉菌和酵母计数.ppt

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -   食品卫生微生物学检验 GB/T 4789 -2003 1、霉菌和酵母计数 2、肉毒梭菌及肉毒毒素检验 3、罐头食品商业无菌的检验 4、乳酸菌检验 2019 - * 一、霉菌和酵母计数  1 范围 2 规范性引用文件 3 设备和材料 4 培养基和试剂 5 检验程序 6 操作步骤 2019 - * 霉菌和酵母菌及其检验 二、检验方法： 　　霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为： 　　将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。 　　对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。 2019 - * 霉菌和酵母菌及其检验 三、程序: 　　1．样品的处理。为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀。 　　2．样品的稀释：为了减少榈稀释倍数的误差，在连续递增稀释时，每一稀释度应更换一根吸管。在稀释过程中，为了使霉菌的孢子充分散开，需用灭菌吸管反复吹吸50次。 　　3．培养基的选择：在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。 　　马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA） 　　孟加拉红（虎红）培养基 高盐察氏培养基 2019 - * 霉菌在孟加拉红培养基上典型特征 霉菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色菌落， 有黑色孢子 。 2019 - * 酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征 酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色菌落 酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色菌落 2019 - * 霉菌和酵母菌及其检验 4．倾注培养。每个样品应选择3个适宜的稀释度，每个稀释度倾注2个平皿。培养基熔化后冷却至45℃，立即倾注并旋转混匀，先向一个方向旋转，再转向相反方向，充分混合均匀。培养基凝固后，把平皿翻过来放温箱培养。大多数霉菌和酵母在25－30℃的情况下生长良好，因此培养温度25~28℃。培养3d后开始观察菌落生长情况，共培养5d观察记录结果。 5．菌落计数及报告：选取菌落数10~150之间的平板进行计数。一个稀释度使用两个平板，取两个平板菌落数的平均值，乘以稀释倍数报告。固体检样以g为单位报告，液体检样以mL 单位报告。关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。 2019 - * 霉菌和酵母菌及其检验 6．霉菌直接镜检计数法：对霉菌计数，可以采用直接镜检的方法进行计数。 　　在显微镜下，霉菌菌丝具有如下特征： 　　平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况下，整个菌丝的直径是一致的。因此在显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线。这是区别霉菌菌丝和其他纤维时最有用的特征之一。 　　横隔：许多霉菌的菌丝具有横隔，毛霉、根霉等少数霉菌的菌丝没有横隔。 　　菌丝内呈粒状：薄壁、呈管状的菌丝含有原生质，在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状。 　　分枝：如菌丝不太短，则多数呈分枝状，分枝与主干的直径几乎相同，有分枝是鉴定霉功得出可靠的特征之一。 2019 - * 肉毒梭菌及肉毒毒素检验  肉毒梭菌是厌氧性梭状芽胞杆菌属的一种。该菌在厌氧环境中能分泌极强烈的肉毒毒素，引起特殊的神经中毒症状 肉毒毒素通过消化道粘膜吸收，经血液扩散至全身，主要侵犯中枢神经系统，因而表现出一系列的神经症状。 主要临床特点：发病初期为无力、腹部不适、咽部发紧、呕吐，继而出现声音嘶哑、饮水发呛、吞咽困难、眼睑下垂、复视等眼部症状。 2019 - * 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 培养基、试剂 明胶磷酸盐缓冲液 10%胰酶水溶液（酶活力1：250） 庖肉培养基 卵黄琼脂培养基 肉毒分型抗毒诊断血清 革兰氏染色 2019 - * 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 样品采集： 可疑食物 病人血清在未使用抗毒素治疗前采集（4-5ml） 病人粪便 疑似患者外伤感染后的坏死组织或者是渗出液 2019 - * 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 1 增菌（产毒培养） 2 分离培养 3 菌落特征及菌体形态 4 菌落特征及菌体形态 5 生化试验 6 肉毒毒素检验（小白鼠腹腔注射） 2019 - * 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 菌落特征及菌体形态 普通琼脂平板上形成直径3-5mm不规则菌落、半透明、绒毛样边缘扩散生长 血平板上形成发丝状或盘状的灰色菌落有β-溶血 卵黄琼脂平板菌落及周围培养基上能分解脂肪表面覆