绵羊体细胞核移植融合效率影响因素的研究.pdf

新疆农业科学 绵羊体细胞核移植融合效率影响因素的研究 郭延华王立民唐 红张译元周 平 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子 摘 要 目的 提高克隆胚胎融合率 方法 从受体卵母细胞的细胞松弛素处理组与对照组 供体细胞的梯 度差速选择 胰酶浓度 消化时间 和 组电脉冲融合参数 等 个环节对绵羊体细胞核移显微操作进行了优化 以重构胚胎的融合率和卵裂率作为检测指标 结果 未经细胞松弛素的卵母细胞组融合率显著高于试验组 而胚胎卵裂率差异不显著 胰酶梯度差速消化供体细胞具有初选作用 各组融合率为 融合压 为 时融合率最高 结论 优化后的程序更适合克隆胚胎的膜融合 关键词 细胞松弛素 胰酶 融合电压 膜融合 中图分类号 文献标识码文章编号 收稿日期 基金项目国家重大转基因专项 国家自然科学基金 兵团博士基金 新疆农垦科学院青 年基金 作者简介郭延华 男新疆喀什人助理研究员研究方向为动物遗传育种与繁殖 通讯作者周平 男四川乐山人副研究员研究方向为动物学 期 郭延华等绵羊体细胞核移植融合效率影响因素的研究 引言 研究意义在转基因克隆羊生产中胚胎移植需要大量的优质克隆胚胎而生产克隆胚胎最为关 键的环节就是重构胚胎融合的数量和质量 而细胞膜的融合成为关键所在 因此提高受体卵母细胞与供 体成纤维细胞的融合对体细胞核移植具有重要的作用 前人研究进展融合主要受到供体细胞类型 与生理状体受体细胞生理状体融合液种类电脉冲等影响 研究采用的核移植程序为卵母细胞的成 熟成熟卵母细胞的软化处理供体细胞的消化显微操作盲吸去核注核融合激活胚胎培养 绵羊 卵母细胞的成熟方法见文献 卵母细胞成熟后去核抽取过多细胞质会破坏细胞内骨架卵母细胞极 其容易破溃死亡 而细胞松弛素 可以抑制细胞内微管和微丝的形成 使细胞内骨 架松弛 增加其柔韧性便于去核 去核后细胞膜能借助磷脂双层的游动性而得到恢复 但细胞膜的