海参岩藻聚糖硫酸酯酶产生菌的筛选鉴定 发酵条件优化及酶学性质研究-食品加工与安全专业论文.docxVIP

海参岩藻聚糖硫酸酯酶产生菌的定、发酵条件优化及粗酶酶学性 海参岩藻聚糖硫酸酯酶产生菌的 定、发酵条件优化及粗酶酶学性 Ⅳ／_泞_ 学位论文完成日期 指导教师签字 答辩委员会成员签字 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 !蕉!麴邀查基丝益蔓楚别直塑的!奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：王籀字日期：力『『年 ∥月p日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》， 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 (必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 薪霞 导师签字： 签字日期：加11年占月7口日 签字日期：≥吲年6月￡日 广 海参岩藻聚糖硫酸酯酶产生茵的 海参岩藻聚糖硫酸酯酶产生茵的 筛选鉴定、发酵条件优化及酶学性质研究 }两要 本文以海地瓜岩藻聚糖硫酸酯(SC．FUC)为诱导底物，从山东威海好当家 集团的参池底泥中筛选得到一株能够有效的利用海参岩藻聚糖硫酸酯并分泌岩 藻聚糖硫酸酯酶的海洋细菌，经鉴定为革兰氏阴性菌，16S rDNA分析确定为黄 杆菌科细菌，并将其命名为Flavobacteriaceae．sp HDJ3，简称HDJ3。 证实了HDJ3的产酶实力后，选择DNS法这种最为经典的还原糖的检测方法 对其所产的酶活力进行定量。 为提高该细菌的产酶活力，通过单因素．响应面实验对其产海参岩藻聚糖硫 酸酯酶的培养基成分进行优化，得出其最佳培养基组成为(w／V)：海参岩藻聚糖 硫酸酯O．28％，酵母粉0．09％，NaCI 2．09％，MgS04 O．1％，CaCl2 0．02％，FeS04 0．002％，K2HP04 0．02％。单因素试验确定了该菌株的最佳培养条件为：起始pH 为7．5，500mL的三角瓶装液200mL，温度为25℃，转速150rpm，发酵时间为36h。 优化后，海参岩藻聚糖硫酸酯酶活力为21．67U／mL，比优化前提高了3．43倍。 HDJ3能够稳定的产生海参岩藻聚糖硫酸酯酶，该酶主要分泌于HDJ3的细 胞内。在温度25℃，pH 7．5条件下发酵36h后，发酵液经离心、超声波破碎、 超滤浓缩除盐、Q．sephaorse Fast Flow阴离子交换层析后得到少量的粗分离后的 酶，并对该样品进行了酶学性质的研究，经过实验确定了酶的最适反应温度是 30℃，最适反应pH是7．5。酶在0．4℃时较稳定，在4℃，放置24h后酶活剩余 80．56％；但热稳定性不高，20℃时保温24h后酶活剩余47．44％。酶的pH稳定 性范围为pH7．0．8．0。当底物中氯化钠浓度大于3％时酶活性较高。当离子浓度为 O．1mmol／L时，NH4+、Ba2+、Ca2+、Li2+、M92+离子对酶反应的作用不明显；Mn2+、 K+、Ni2+有一定的抑制作用；Zn2+、Cu2+、Fe2+、A13+表现为明显的抑制作用， 分别使酶活下降了32．27％、54．22％、51．65％和53．54％。当离子浓度达到1mmol／L 时，K+、Cd”、Ni2+、Zn2+、Mn2+、H92+、Cu2+离子表现为明显的抑制作用，Ba2+、 Ca2+离子对酶反应稍有促进作用。利用海参岩藻聚糖硫酸酯酶对岩藻聚糖硫酸酯 进行酶解，得到一定分子量的高活性的寡糖，为岩藻聚糖硫酸酯的高值化利用和 分子结构的解析打下了基础。 分子结构的解析打下了基础。 关键词：海参；岩藻聚糖硫酸酯；岩藻聚糖硫酸酯酶：酶活 Screening Screening and identifying of a fucoidan—degrading marine bacterial strain，optimization of enzyme production condition，andcharacterization of the l-uc0 anase Abstract In this contest，a marine bacterium strain na