安徽医科大学2010下学期药理实验方法学课件.ppt

第22章 抗炎免疫药物实验方法 《药理实验方法学》（第四版） 人民卫生出版社 魏伟 教授 主编 临床药理研究所 常 艳 主要内容和重点章节 第1节 实验动物的选择 第2节 抗炎实验方法 一、非特异性炎症模型 二、免疫性关节炎模型 三、骨关节炎模型 四、其它免疫性炎症模型 第3节 抗炎药物作用机制的研究方法 第4节 抗痛风药物的实验法 第1节 实验动物的选择 实验性炎症应该选用哺乳类动物，不同的实验模型选用的动物不同。 足跖浮肿模型多采用大鼠，形成过敏性炎症多选豚鼠。 家兔最易产生发热反应，且发热反应典型、恒定，因而常用。 曾致炎组织比初次炎症刺激时反应微弱，因此不宜在同一部位反复复制炎症。 性别差异对炎症模型可能存在明显影响，为了排除雌激素等性激素对炎症反应的影响，一般采用雄性动物。 第2节 抗炎实验方法 一、非特异性炎症模型 （一）急性和亚急性炎症的实验方法 （二）增殖相（肉芽肿形成）的实验方法 二、免疫性关节炎模型 三、骨关节炎模型 四、其它免疫性炎症模型 一、非特异性炎症模型 非特异性炎症反应具有三个明显的时相： ①急性时相，时间短暂，以局部血管扩张和毛细血管通透性增加为特征； ②亚急性时相，以白细胞和吞噬细胞的浸润为特征； ③慢性增殖相，以组织变性和纤维化为特征。 （一）急性和亚急性炎症的实验方法 紫外线诱导的豚鼠红斑 毛细血管通透性测定 大鼠肠系膜小静脉白细胞粘连抑制实验 鼠耳肿胀法 5. 大鼠足爪肿胀法 6. 大鼠胸膜炎 7. 大鼠气囊滑膜炎 8. 尿酸盐诱导的滑膜炎 9. 急性结膜炎 10. 实验性中耳炎 1. 紫外线诱导的豚鼠红斑 【操作步骤】 （1）选用体重350g左右的白化病豚鼠，性别不限。 （2）实验前18h将动物两肋和背部的毛剃去，用脱毛剂脱毛，然后用温水将脱毛剂和毛冲除。 （3）第二天在紫外线照射前30min灌服实验药物10ml/kg，对照组灌服同体积的溶媒。 （4）将豚鼠置于一皮套中，皮套中部留有一1.5cm×2.5cm的洞口，使其脱毛区暴露于紫外线下。在暴露前紫外灯预热30min。将豚鼠置于紫外灯下一恒定距离（20cm），照射2min。实验者戴手套和紫外线眼镜防止紫外线的损害。 照射后2h、4h对红斑程度按下列标准进行评分： 0=无红斑；1=弱的红斑；2=较强的红斑；3=很强的红斑。 2. 毛细血管通透性测定 （1）放射性同位素－染料定量测定法 【基本原理】急性炎症时，随着血管－组织屏障功能的改变，血浆蛋白透入血管外组织速率加快。本法在应用化学介质致炎的基础上，同时静注一定剂量和呈一定比例的染料和放射性同位素结合的白蛋白，随后测定局部炎性病灶内的染料和放射活性，可定量而精确地测得血管通透性的变化程度。 （2）血浆外渗连续测定法 【基本原理】本法系在皮肤炎症时静注同位素标记白蛋白，通过连续记录脉冲数的方法测定其外渗的时量变化，并能进一步了解血管通透性的全过程，适用于药物作用强度和作用时间的动态观察。 （3）荧光素测定法 大鼠囊袋致炎模型 【基本原理】 本法系在角叉菜胶引起大鼠囊袋炎症模型基础上，应用荧光素异硫氰酸结合牛血清白蛋白（F-BSA）作为标示物静脉注射，并且在不同时间测定囊内渗出液的荧光素强度，以此作为炎症病灶中血管通透性指标。具有灵敏、精确、无毒、重现性好等优点。 B. 大鼠皮肤致炎模型 3. 大鼠肠系膜小静脉白细胞粘连抑制实验 【基本原理】正常情况下，当白细胞与血管壁触击时，此种触击表现为弹性，细胞弹回管腔。炎症时，组织的化学改变引起细胞的非弹性触击和粘连性的增加，导致白细胞沿内皮表面的滚动。当粘连进一步增加时，白细胞的滚动减慢，随后逐渐停止并迁移至血管外。 此种情况可依靠制备一麻醉鼠的肠系膜小静脉并用显微镜观看白细胞的流动和滚动情况来进行在体观察。实验过程中，白细胞粘连于血管壁是用甲酰基-L-蛋氨酰-L-亮氨酸-L-苯丙氨酸（fMLP）人工诱导的，fMLP通过其受体激活白细胞，引起细胞表面的L-选择素迅速表达，从而导致细胞沿内皮表面滚动。 4. 鼠耳肿胀法 【操作步骤】 （1）选用雄性小鼠或雄性SD大鼠，小鼠的体重为20g左右，大鼠的体重为170g左右，每组为10只动物。 （2）致炎剂为二甲苯或巴豆油混合液致炎。 （3）实验或对照药物溶解于致炎剂中，小鼠的药物浓度为0.03～lmg/ml，大鼠的药物浓度是小鼠的3～10倍。 （4）动物用乙醚麻醉，在右耳的前后两面涂布致炎剂（对照）或含有药物的致炎剂（实验组）。致炎剂的体积为：二甲苯0.02 ml/只