光滑念珠菌对氟康唑耐药机制的研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

㈣幽嵝旧『『J『『㈣㈣Y1 ㈣幽嵝旧『『J『『㈣㈣ Y1 90d岩芝j；|}。 目 录 中文摘要 ．1 英文摘要 ．3 研究论文光滑念珠菌对氟康唑耐药机制的研究 引言 ．6 第一部分光滑念珠菌对氟康唑的敏感性分析 前言日IJ舌 ．8．8 材料与方法 ．9 结果 ．12 附表 ．1 3 讨论 ．1 6 小结 ．17 第二部分光滑念珠菌ERGll、CDRl、CDR2及MDRl基因与氟康唑耐 药关系的研究 前言日U舌 1818 材料与方法 ．．19 结果 ．．27 附图 ．．28 附表 ．．30 讨论 ．．33 小结 ．35 结论 ．。 36 参考文献 37 综述光滑念珠菌的流行现状及耐药机制的研究进展 42 附录 55 致谢 ．．57 个人简历 ．58 中文摘要光滑念珠菌对氟康唑耐药机制的研究 中文摘要 光滑念珠菌对氟康唑耐药机制的研究 摘 要 目的：由于广谱抗生素的广泛使用、免疫缺陷人群的增多等，使得临 床真菌感染的发病率不断上升，念珠菌是医院感染的常见致病性真菌，近 年来光滑念珠菌引起的真菌感染明显增多，由于光滑念珠菌对I临床常用的 三唑类抗真菌药物敏感性差，其耐药现象已成为临床治疗的难题。 本研究收集临床分离的光滑念珠菌，检测其对氟康唑的耐药性，并对 三唑类药物作用靶酶的编码基因ERGll和外排泵基因CDRl、CDI也和 MDRl进行研究，以了解光滑念珠菌对氟康唑耐药的机制，为临床合理使 用抗真菌药物提供依据。 方法： 1 收集临床分离的光滑念珠菌98株，用M44．P纸片扩散法和M27-4微 量稀释法检测光滑念珠菌对氟康唑的敏感性，以了解光滑念珠菌的耐药状 况。 2采用PCR技术对光滑念珠菌的靶酶基因ERGll编码区进行扩增，并 对目的基因进行双向测序，测序结果与网上公布的标准序列比对，以研究 ERGll基因突变与耐药之间的关系。 3 采用半定量ImPCR技术，检测氟康唑耐药株与敏感株靶酶基因 ERGll、外排泵基因CDRl、CDR2和MDRl的删5斟A表达情况，以研 究基因表达与耐药之间的关系。 结果： l 98株光滑念珠菌中，8株对氟康唑耐药，耐药率为8．16％；剂量依赖 性敏感株15株，所占比例为15．31％；敏感株75株，所占比例为79．53％。 98光滑念珠菌对两性霉素B和5．氟胞嘧啶敏感率均为100％， 8株耐药 株全部对伊曲康唑耐药，其中3株对伏立康唑耐药。 2对ERGl l基因的编码区进行测序，其结果与标准序列进行比对后发现 光滑念珠菌耐药株和敏感株的ERGll基因共有8个点突变，分别为 T866A、·C1103T、T1280C、A1325G、C1640T、G166lA、T1931A和 A2042G，均为同义突变，不引起所编码氨基酸的改变，其中5个点突变 中文摘要在敏感株和耐药株中均出现，分别为C1103T、T1280C、A1325G、C1640T 中文摘要 在敏感株和耐药株中均出现，分别为C1103T、T1280C、A1325G、C1640T 和G166lA，2个点突变只出现在耐药株中，分别为T866A和A2042G， 1个点突变只出现在敏感株中，为T193lA。 3 将耐药株与敏感株的ERGll、CDRl、CDI也和MDRl基因mRNA的 表达水平进行比对，比对中发现，EI沁1 1、CDRl和CDI也基因砌5斟A 在耐药株中的表达均高于敏感株，MDRl基因n武NA的表达在耐药株与 敏感株之间没有显著性差异。 结论： 1 研究表明光滑念珠菌对氟康唑的耐药率为8．16％，并且三唑类药物之 间存在交叉耐药现象，而对两性霉素B和5．氟胞嘧啶则有较好的敏感性。 2研究未发现因ERGll基因突变导致所编码的氨基酸的改变，进而使光 滑念珠菌对氟康唑产生耐药的现象，ERGll基因突变的意义有待进一步 研究。 3 研究发现ERGl l、CDRl和CDI也基因IIl】[斟A表达的上调是光滑念珠 菌耐药性形成的部分机制，而MDRl基因在耐药性形成中的作用有待加 大样本量进一步研究。 关键词：光滑念珠菌；耐药性；氟康唑；ERGll基因；CDRl基因； CDI也基因；MDRl基因 英文摘要Mechanisms 英文摘要 Mechanisms of Fluconazole Resistance in Candida glabtata ABSTRACT objectiVe：Because of broad—spectmm antibiotics was used in clinic，and increased number Of immunocOmpromised patients，the inf酏tions of Fungus is increasing quickly．Candida is t11e populaur oppor