海水鱼类主要病原弧菌致病性及外膜蛋白研究-海洋生物学专业论文.docxVIP

海水鱼类主要病原姐菌致粕性发外脾丑i 海水鱼类主要病原姐菌致粕性发外脾丑i Ej研究 海水鱼类主要病原弧菌致病性及外膜蛋白研究 摘要 海水养殖向高密度、集约化发展的同时，鱼类病害问题日益突出，其中弧菌 病害是危害海水养殖鱼类最严重的细菌病害之一，许多弧菌可感染多种鱼类并造 成大量死亡，本文主要对山东地区海水养殖场分离的致病弧菌进行了以下几方面 的研究： 从自然发病大菱鲆体内分离到病原菌TL01。经生理生化鉴定和分子生物学签 定为鳗弧菌：对从自然发病的鲈鱼、大菱鲆体内分离的病原鳗弧菌W．1、TL01及 哈维氏弧菌sF．1的致病性研究表明，鳗弧菌W．1、11∞1对牙鲆、大菱鲆有较强 的致病性。W-1对牙鲆和大菱鲆腹腔感染的半数致死量LDso分别是2．06× 104cfu／g和3．04X103cfu／g：TL01对牙鲆和大菱鲆腹腔感染的半数致死量LDso 分别是5．09X104cf‘I／g和2．32x101cfu／g：哈维氏弧菌SF-1对牙鲆和大菱鲆腹腔 感染的半数致死量LD50分别是9．65x103cfu／g和8．63xlOMu／g。 进行了鳗弧菌TL01、Wd抗血清制备，血清学实验表明，鳗弧菌W．1和11∞1 都属于02血清型，哈维氏弧菌SF．1与鳗弧菌各血清型菌株之间无明显交叉反应。 对13株弧菌属的不同种的菌株、10个不同血清型的鳗弧菌标准菌株、9株哈 维氏弧菌和4株副溶血弧菌的标准菌株的外膜蛋白分别提取并进行了分析；结果 表明13株弧菌属的不同种的菌株外膜蛋白的SDS图谱各不相同。不同菌种 问主要的外膜蛋白有较大差异．一般有垂5条，分子量范围为25kD～70kD。 10种血清型的鳗弧菌的主要外膜蛋白的图谱各不相同。每个血清型的鳗弧菌 标准菌株外膜蛋自有2．6条。分子量主要在25kD-70kD之阃，但所有鳗弧菌均有 1～2条主要外膜蛋白，分子量界于40kD和55kD之间．且在大部分菌株中其中～ 条的分子量在40kD左右。从当地分离的病原菌W．1和TL01最主要的外膜蛋白为 40kD左右，另穸卜还各有一条主要外膜蛋自带，分子量分别为53kD和44kD左右。 哈维氏弧菌菌株之间主要外膜蛋白的分子量相差比较大，没发现有各菌株间 共同的主要蛋白，主要外膜蛋白有3．6条，分子量集中在30-48kD的区域。副溶 血弧菌几株菌的外膜蛋白图谱总体比较相似，条带数比较多，一般多于3-5条，主 中田海洋大学硕d：Of兜生论文要外膜蛋白分子量界于30kD．50kD。 中田海洋大学硕d：Of兜生论文 要外膜蛋白分子量界于30kD．50kD。 研究了不同培养基和培养条件对弧菌对外膜蛋白表达的影响，结果表明在缺 铁基础培养基CM9中37。C条件下鳗弧菌w—l、TL01表达了一条分子量较小的主要 外膜蛋白，分子量为35kD左右。 用Sephadex-G100、Sephacryl S-100凝胶层析和DEAE-Sepharose Fast Flow、 DEAE-纤维素层析对鳗弧菌W．1和TL01的主要外膜蛋白进行了分离，均未取得 理想的分离效果。最后采用SDS电泳分离后，直接在凝胶上切下目的蛋白， 得到了电泳纯的鳗弧菌主要外膜蛋白，其分子量为35kD。 用鳗弧菌外膜蛋白以注射接种的方式对海水养殖大菱鲆鱼苗进行免疫．4周后 检测血清中特异性抗体，然后用鳗弧菌悬液(3．7x10”cfu／m1)0．2ml腹腔注射感 染免疫鱼，结果表明用鳗弧菌外膜蛋白免疫后能刺激大菱鲆产生特异性免疫反应， 免疫4周人工感染后的免疫保护力为45．45％。 关键词：弧菌致病性外膜蛋白抗原性 2 海水鱼类主登病原弧诗致病性及外腆主If白研究Stud 海水鱼类主登病原弧诗致病性及外腆主If白研究 Stud i es on the pathogen i 0 i ty and outer membrane protejDS of majn pathogenjc Vjbr jOS of mar jne fjshes Abs打act Culture of marine fish progresses to the level of high density and intensity， accompanied by a prominence of disease problem．Some strains of Vibrio species are the most serious pathogens，which can infect a wide range of fish species and cause Fnass death，The present study is placed upon the following aspects： Two pathogenic Vibrio ang