冠心康对同型半胱氨酸诱导内皮细胞氧化损伤作用的实验研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：豆峄 签字日期：型虹年工月坦f I 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构 送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论 文。 论文作者签名：副筮整．．一指导教师签名：乡兰业 签字Et期：麴孟年五月丑}j 冠心康对同型半胱氨酸诱导内皮细胞氧化损伤作用的 冠心康对同型半胱氨酸诱导内皮细胞氧化损伤作用的 实验研究 硕士研究生：刘铁峰 指导教师：左云飞 教授 专业名称：临床检验诊断学 摘 要 目的：高同型半胱氨酸血症(HHcy)是动脉粥样硬化(AS)发生的 一个独立危险因素。但其致AS的具体分子机制还不十分清楚。目前多 数研究认为，高同型半胱氨酸(HCY)导致血管内皮功能损害，是AS 发生的始动环节。故深入研究HHcy对血管内皮细胞功能的损伤机制尤 为重要。众所周知，血管内皮细胞可以合成和分泌血管舒张因子一氧化 氮(NO)和收缩因子内皮素(ET)。正常情况下，两者保持平衡与稳定， 来维持血管的舒张状态。当内皮细胞受损时，NO的生成和释放缺陷，平 衡倾向于ET，从而导致体内血管收缩呈优势，舒张功能下降。而血管舒 张功能降低是AS最早的表现。有研究显示，生理情况下，NO是由内皮 细胞经内皮型一氧化氮合酶(eNOS)专一性催化左旋精氨酸生成；而血 管ET系统也以内皮细胞产生的内皮素．1(ET-1)为主要表达。另有实验 表明，HCY可导致内皮细胞分泌活性氧(ROS)，ET-1明显升高，生成 NO下降。推测HCY能影响血管内皮细胞ROS、NO、ET-1的表达。本 研究对培养的HUVECS施以不同浓度HCY处理后，检测其ROS、NO、 ET-1的水平，借以证明HCY对血管内皮细胞功能的损伤，进而探讨中 药冠心康在HCY所致AS中的保护作用。 方法：制备动物血清。体外培养的HUVECs，随机分为4组：(1) 正常对照组；(2)模型组：HCY组(加入终浓度为O．25、O．5、1．00、 2．00mmol／L)；(3)中药组：预先加入终浓度为1．00mmol／L的HCY孵育 2h，然后加入10％中药血清；(4)西药组(氟伐他汀组)：预先加入终浓 度为1．00mmol／L的HCY孵育2h，然后加入10％西药血清； 继续培养 24h，每组设6个复孔。用HCY和药物干预细胞24小时后，流式细胞仪 检测细胞内ROS水平；采用酶联免疫吸附法测定细胞ET．1、NO含量。 结果：模型组作用于HUVECs 24小时，ROS和ET．1显著高于正常 对照组(7．80±1．19、15．37±1．27、21．00±2．65、35．56±2．96对照2．96 ±0．53：87．67±10．95、122．29±8．13、139．03±5．39、166．48±13．12对．照40．61±0．64；P0．05)，NO含量显著降低(185．97±15．36、147．75±15．86、 ±0．53：87．67±10．95、122．29±8．13、139．03±5．39、166．48±13．12对．照 40．61±0．64；P0．05)，NO含量显著降低(185．97±15．36、147．75±15．86、 115．22±10．98、80．54±9．93对照214．09±18．38；P0．05)；HCY呈浓度 依赖性地显著增加ROS生成及ET．1释放，且明显抑制NO的生成 (P0．05)。冠心康颗粒与氟伐他汀与HCYl．0组相比明显延缓了HCY 致AS的进程，抑制了ROS、ET．1的释放(3．77±O．60、10．89±0．72对 照21．OO±2．65，46．18±5．96、74．35±4．26对照139．03±5．39；P0．05)， 增加了NO的分泌(203．95±12．85、186．68±18．35对照115．22±10．98； p0．05)。 结论：1．HUVECs体外培养是构建血管内皮细胞模型比较好的实验 手段，采用载药血清研究中药的作用