注射用布氏菌活疫苗免疫学评价-中国医药生物技术.PDF

中国医药生物技术 2014 年 6 月第 9 卷第 3 期 Chin Med Biotechnol, June 2014, Vol. 9, No. 3 191 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.03.006 ·论著· 注射用布氏菌活疫苗免疫学评价 陈成，魏东，李恪梅，付丽丽，解晓露，黄长江，王国治 【摘要】 接受，从而影响疫苗的广泛使用。鉴于布病疫情控 目的 以小鼠为动物模型，通过检测布氏菌活疫苗免疫小鼠 制的需要，我们采用具有经济性好和安全性高的皮 产生的体液免疫、细胞免疫应答及保护力，对其进行免疫学 内注射接种方式替代传统的皮上划痕。本次研究以 评价。 小鼠为动物模型，采用皮内注射方式免疫，从体液 方法 将 30 只小鼠随机分为 3 组，皮下免疫布氏活疫苗， 免疫、细胞免疫和保护力试验三个方面的结果全面 免疫 4 周后分离血清及脾脏淋巴细胞。ELISA 法检测免疫 评价疫苗的免疫原性和免疫保护效果。 动物血清中总 IgG 抗体，抗体亚类 IgG1 及 IgG2a ； ELISPOT 法检测分泌 IFN-γ、IL-4 的脾脏淋巴细胞数目， 1 材料与方法 以及用 ELISA 方法检测体外再刺激后小鼠脾细胞分泌 1.1 主要材料 IFN-γ、IL-4 的细胞因子水平；用羊布氏菌弱毒株 M5 攻击 1.1.1 动物 SPF 级 BALB/c 小鼠，6 ~ 8 周， 免疫动物，通过脾脏细菌计数评价布氏活疫苗的免疫保护 白色雌性，共 30 只，由中国食品药品检定研究院 作用。 （简称中检院）实验动物中心提供，实验动物生产 结果 用 ELISA 法检测到免疫布氏活苗的小鼠体内有特 许可证号：SCXK （京）2009-0017 ，饲养于中检院 清洁级动物室。 异性抗体产生；ELISPOT 可检测到较高的分泌 IFN-γ 脾脏 1.1.2 菌种 皮下注射用布氏菌活疫苗及羊布氏 淋巴细胞数目，ELISA 方法可检测到较高的 IFN-γ 水平， 表明布氏活疫苗主要诱导 Th1 型免疫应答；通过布氏活疫 菌 M5 弱毒株均由中检院结核病疫苗室提供。 苗保护力分析，表明该疫苗具有较好的免疫保护效果。 1.1.3 实验仪器 Bio-II-A 生物安全柜购自西班 牙 Telstar 公司；Dragon-MK3 酶标仪购自芬兰 结论 布氏疫苗采用注射免疫途径是可行的，免疫后能获得 Labsystems 公司；DH6000 AB 型恒温培养箱购自 较好的免疫效果。 天津市泰斯特仪器公司；高速离心机购自德国 【关键词】 布氏疫苗； 抗体生成； 免疫活性 Eppendorf 公司；酶联斑点分析仪购于美国 CTL 中国医药生物技术, 2014, 9(3):191-195 公司；CO2 培养箱购于美国 Napco 公司；加样枪 购于 Gilson 公司。 布氏菌病（Brucellosis ，简称布病）是布氏菌 引起的能够在人和动物中传播的一类人兽共患病[1-3] 。 1.1.4 试剂耗材 牛血清白蛋白和 ConA 购自美