枯草芽孢杆菌犫犻狅犐基因的克隆和高效表达及犅犻狅犐蛋白的纯化.PDF

第 卷 第 期 西北农林科技大学学报（自然科学版） ３６ １２ Ｖｏｌ．３６ Ｎｏ．１２ 　 年 月 （ ） ２００８ １２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ． Ｄｅｃ．２００８ ｙ 枯草芽孢杆菌犫犻狅犐基因的克隆和高效表达 及犅犻狅犐蛋白的纯化 ， ， ， １ １２ １２ ２３ 龚月生 ，王 晶 ，刘锦妮 ，袁新宇 ， 　 ， ， １２ ２ １２ 姬生跃 ，王 俊 ，杨明明 　 （西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 ；武汉阳光广济医药开发有限公司，湖北 武汉 ； １ ７１２１００２ ４３００６４ ３湖北工业大学 生物工程学院，湖北 武汉 ４３００６４） ［摘 要］ 目的】克隆和表达枯草芽孢杆菌（ ） 基因并纯化表达产物。 方法】提取 犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊犫犻狅犐 犅．狊狌犫 　 　 基因组 ，从中扩增 基因并将其克隆到大肠杆菌（ ）的表达载体 （ ）上，构 狋犻犾犻狊１Ａ７４７ ＤＮＡ 犫犻狅犐 犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻 ｐＥＴ２８ａ＋ 建 的表达载体 。将重组质粒 电转化到大肠杆菌表达宿主 （ ）中进行 诱 犫犻狅犐 ｐＥＴ２８ａ犫犻狅犐 ｐＥＴ２８ａ犫犻狅犐 ＢＬ２１ＤＥ３ ＩＰＴＧ 导表达，对表达产物 用 ２＋ 亲和层析树脂进行纯化，并对纯化蛋白进行波长扫描。 结果】成功构建了表 ＢｉｏＩ ＮｉＮＡＴ 达载体 ｐＥＴ２８ａ犫犻狅犐，酶切鉴定结果正确并在大肠杆菌中表达成功，经 ＩＰＴＧ诱导 ８ｈ后，重组蛋白ＢｉｏＩ的表达量占总 可溶性蛋白的 ；波长扫描发现，重组蛋白 在 处有特征吸收峰。 结论】 基因克隆表达成功，其表 ２０％ ＢｉｏＩ ４００ｎｍ 犫犻狅犐 达产物 ＢｉｏＩ具有 Ｐ４５０蛋白的特征，为蛋白性质的进一步研究和抗体的制备奠定了基础。 ［关键词］ 枯草芽孢杆菌； 基因；大肠杆菌 （ ）；高效表达 犫犻狅犐 ＢＬ２１ＤＥ３ 　 ［中图分类号］ ［文献标识码］ ［文章编号］ （ ） Ｑ７８６ Ａ