课件：饮用水中微生物检测方法粪链球菌、铜绿假单胞菌、产气荚膜梭菌资料.ppt

- - - - - - - - - - - - - - - - 第一部分 粪链球菌的检测 2019 - * 粪链球菌特性 粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5微米~1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1毫米~2毫米，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃~45℃ pH9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。 2019 - * GB/T 8538-2008粪链球菌检测 适用于饮用天然矿泉水的检测 原理 滤膜法：250ml水样用0.45μm的滤膜过滤，滤膜在KF链球菌琼脂上于36℃±1℃中培养48h，选择红色或者粉红色菌落在脑-心浸萃琼脂上进行确证实验，过氧化氢酶反应阴性，并能在脑-心浸萃液体培养基上于45℃培养后浑浊生长，则存在，结果阳性。 2019 - * 培养基 KF链球菌琼脂平板 脑-心浸萃琼脂液体培养基 脑-心浸萃琼脂斜面 2019 - * 粪链球菌检测程序 2019 - * 推测性试验 水样过滤 依照水质确定稀释倍数，使得过滤250ml水样滤膜上菌落数20个~100个。 培养：36℃±1℃培养48h。 计数 对滤膜上红色或者粉红色菌落进行革兰氏染色、显微镜镜检，G+，计数250ml水样中粪链球菌数。 过滤操作方式和滤膜放置培养时注意事项 2019 - * KF链球菌琼脂上菌落 2019 - * 确证性试验 滤膜上的典型菌落在脑-心浸萃琼脂斜面培养，36℃±1℃ 24h~48h，有菌落继续。 过氧化氢酶反应 取培养物在洁净载玻片上，滴加3%过氧化氢。有气泡阳性，不是粪链球菌；无为阴性，继续。 继续培养 转移到脑-心浸萃液态培养基和胆汁液态培养基分别于45℃ 48h和36℃±1℃ 3d。 判定：若生长，为阳性。 2019 - * 报告 依据典型菌落的计数和确证性试验为阳性的结果，计算250ml水样中粪链球菌数量，结果以CFU/250mL计。 2019 - * 第二部分 铜绿假单胞菌的检测 2019 - * 铜绿假单胞菌特性 一种常见的条件致病菌，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一， 铜绿假单胞菌有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。 本菌为专性需氧菌，生长温度范围25~42℃，最适生长温度为25~30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等。在血平板上会有透明溶血环。 2019 - * GB/T 8538-2008铜绿假单胞菌检测 适用于饮用天然矿泉水的检测 原理 滤膜法：250ml水样用0.45μm的滤膜过滤，滤膜在CN琼脂上于36℃±1℃中培养48h，能生长并产生绿脓菌素，或者生长且氧化酶阳性、紫外360±20nm产生荧光、能利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性菌无芽孢杆菌，则存在绿脓杆菌，结果阳性。 2019 - * 培养基 假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂平板 金氏B培养基斜面 乙酰胺肉汤 营养琼脂 氧化酶试剂 钠氏试剂 2019 - * 铜绿假单胞菌检测程序 2019 - * 推测性试验 水样过滤 依照水质确定稀释倍数，用0.45μm的滤膜过滤250ml水样。 培养：CN培养基 36℃±1℃培养40h~48h。 计数 20h~24h和40h~48h观察菌落并计数； 蓝色or绿色判定为铜绿假单胞菌，非蓝绿产荧光和红褐色菌落进一步确证性试验。 过滤操作方式和滤膜放置培养时注意事项 2019 - * 铜绿假单胞菌在CN板上 2019 - * 营养琼脂 在CN琼脂上培养20~24h的可疑菌落接种，在36℃±1℃培养20h~24h，检查再次纯化的菌落。 氧化酶试验 选最初为红褐色菌落试验，10s内成深蓝紫色为阳性反应，注意反应操作方法。 金氏B培养基 红褐色、氧化酶阳性的接种 36℃±1℃ 24h~5d，每天紫外灯检，5d内有荧光为阳性。 乙酰胺肉汤试管 接种营养琼脂纯化的菌落36℃±1℃ 20~24h，加钠氏试剂，色泽深黄到砖红，产氨阳性。 确证性试验 2019 - * 金氏B培养基产生荧光 阴性 阳性 阳性 2019 - * 乙酰胺肉汤培养液 阳性 阴性 砖红色 深黄色 2019 - * 计数结果及报告 滤膜上特征菌落证实为铜绿假单胞菌的菌落，计