课件：医学文库网厌氧菌郑州大学第一临床学院冯羡菊.ppt

培养特性 生长迅速，代谢活跃，45℃生长最好 血琼脂平板：双层溶血环 内环完全溶血-θ毒素 外环不完全溶血-α毒素 蛋黄琼脂平板： Nagler反应 牛奶培养基：“汹涌发酵” （stormy fermentation） 双层溶血环 B Nafler反应 汹涌发酵现象 C 2019 - * 标本的检查方法 实验室收到标本应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应将标本保存于室温（冷藏对厌氧菌有害）。 直接检查：实验室收到标本应仔细观察其性状，包括气味、是否脓性、带血或黑色坏死组织、硫磺样颗粒及紫外灯下有无荧光等。 除血液外，各种标本均须直接涂片作革兰染色镜检，发现染色不均，形态奇特者常为厌氧菌的表现。 2019 - * 菌 名 　革兰染色　　　 形态及其他特征 脆弱类杆菌　　 G－　 两端钝圆着色深，中间色浅不均匀，有空泡，长短不一，标本有琥珀味 产黑色素普雷沃菌　G－ 　　球杆菌，可见多形性，长短不一，紫外线照射发红色荧光，标本有恶臭 具核酸杆菌　　　　G－ 　　菌体细长，两头尖，紫色颗粒沿菌体长轴成双排列，标本有丁酸味 坏死梭杆菌　　　　G－　　菌体细长，高度多形性，长短不一，菌体中部膨胀呈圆球形 韦荣球菌　　　　　G－　　极小的革兰阴性球菌 消化链球菌　　　　G＋　　球形或卵圆形，呈链状的小球菌，易染成阴性 乳酸杆菌　　　　　G＋ 　　细长无芽胞，有时多形性，标本有乳酸气味 痤疮丙酸杆菌　　　G＋　　排列呈X、Y、V或栅状，标本有丙酸气味 放线菌　　　　　　G＋　　分枝呈棒状， X、Y、V或栅状排列，脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味 破伤风梭菌　　　　G＋　　细长鼓槌状，极端芽胞，圆形 产气荚膜梭菌　　　G＋　　粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜 艰难梭菌　　　　　G＋　　粗长杆菌，芽胞卵圆形或长方形，位于次极端 厌氧菌的初步鉴定 2019 - * 标本的分离培养 初代培养：厌氧菌的初代培养比较困难，不仅要创造无氧环境，还要选择适当的培养基。 在培养基选择上应注意： 1.尽量使用新鲜培养基，2～4ｈ内用完； 2.使用前放入无氧环境，预还原处理24～48ｈ； 3.也可采用预还原灭菌法制备的培养基； 4.液体培养基应煮沸10min，驱除溶解氧，并迅 速冷却，立即接种。 2019 - * 培养基的选择 根据镜检结果选择合适的培养基，常用的有非选择性和选择性培养基两种。 非选择培养基：以牛心脑浸液及布氏肉汤为基础，补充0.5%酵母浸出液，5μg/ml氯化血红素、10 μg/ml维生素K1及5%~10%的脱纤维血的强化血平板。几乎能培养出所有的厌氧菌。 2019 - * 培养基的选择 常用的选择培养基: 1.七叶苷胆汁平板（BBE） 用于脆脆弱类杆菌 2.卡那万古冻溶血平板（KVLB） 可抑制大多数兼性 厌氧菌，使产黑色素普雷沃菌早期产生黑色素 3.FS培养基 梭杆菌选择培养基 4.VS培养基 韦荣球菌选择培养基 5.CCFA培养基 艰难梭菌选择培养基 6.卵黄平板（EYA）和兔血平板 产气荚膜梭菌 2019 - * 标本的接种 初代培养应同时接种固体、液体两种培养基，且每份标本应同时接种3个平板，分别置有氧、无氧和含5~10%CO2环境培养。 为了便于在混合培养物中发现厌氧菌，一般将标本分3区划线接种于平板上，在1、2区交界处，贴一张含5μg/片的甲硝唑纸片，如纸片周围出现抑菌圈，表明有厌氧菌存在。 2019 - * 培养方法 通过物理、化学或生物学等方法，创造一种无氧的环境 常用的厌氧培养法： 1.厌氧罐法 2.气袋法 3.厌氧手套箱 4.厌氧工作站 2019 - * 结果观察 厌氧菌的初代培养生长较慢，故应在48ｈ后才能初步观察 观察时应注意： 1.厌氧菌在对数生长期对氧非常敏感，故在 培养的48ｈ内不应使细菌暴露于空气中 2.标本镜检阳性，但培养48ｈ却无菌生长， 应继续培养5～7ｄ。　　 2019 - * 次代培养和厌氧菌的确定 初代厌氧培养有细菌生长时，必须做耐氧试验以确定是否为厌氧菌。 方法：从每个平板上挑取4~5个不同性状的菌落，每个菌落分别接种3个平板（每个平板分4~6个区，可同时做4~6个菌落的次代培养）。分别放有氧、无氧和含5%~10%CO2环境中培养48ｈ，如只在厌氧环境中生长的细菌，即为厌氧菌。 2019 - * 鉴定试验 形态与染色：不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态，同时也为鉴定厌氧菌提供参考依据。 菌落性状：包括其形态、大小、色素、荧光及溶血等 快速鉴