植株生理生长指标测定.docxVIP

.. 根系活力的测定（TTC法） 植株根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部分的生长、营养状况及产量水平。 一、原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。 二、材料、设备仪器及试剂 （一）材料 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 （二）仪器设备 1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。 （三）试剂 1、乙酸乙酯（分析纯）。 2、次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。 3、1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。 4、0.4％TTC溶液：准确称取TTC 0.4g，溶于少量水中。定容到100ml。 5、磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7）： 6、1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。 7、0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。 三、实验步骤 1、定性测定 （1）配制反应液：把1%TTC溶液、0.4 mol/L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1~3h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。 2、定量测定 （1）TTC标准曲线的制作 取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 （2）称取根尖样品0.5g，放入10ml烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。 （3）把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲月替。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。 四、结果计算 单位质量鲜根的四氮唑还原强度 C—从标准曲线查出的四氮唑还原量（mg）； W—样品质量（g）； t —反应时间（h）。  植物体内硝酸还原酶活力的测定 硝酸还原酶（nitrate reductase, NR），是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐（NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O）。产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。 生成的红色偶氮化合物在540 nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般单位鲜重以μg氮/（g·h）为单位。 NR 的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定；离体法复杂，但重复性较好。 Ⅰ离体法 一、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 水稻、小麦或其他植物叶片、幼穗等。 （二）试剂 1、亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯NaNO2 0.9857g溶于无离子水后定容至1000mL，然后再吸取5mL定容至1000mL，即为含亚硝态氮的1μg/mL的标准液。 2、0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：Na2HPO4·12H2O 30.0905g与NaH2PO4·2H2O 2.4965g加无离子水溶解后定容至1000mL。 3、1％磺胺溶液：1.0g磺胺溶于100mL浓度为3mol/L的HC