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液相色谱基础知识 一、色谱起源 二、定义 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同 而进行分离的技术 移动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱固定液 液相色谱流程图 流动相 流动相选择注意事项： 纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 反相液相色谱 流动相极性大于固定相极性 样品的保留顺序是非极性组分保留值大，极性组分先流出。 正相液相色谱 流动相极性小于固定相极性 溶剂前处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 溶剂前处理 脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的 气泡 气泡对测定的影响： 1）柱流量不准 2）检测器基线波动 脱气注意点： 1）每天脱气(无在线脱气器时） 2）混合溶剂脱气时间不能过长 输液泵 送液方式： 恒流控制 恒压控制 岛津VP系列输液泵 进样器 自动进样器 手动进样器 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入 柱温箱 分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性 色谱柱 1）柱压低于150kgf/cm2 2）柱温在40℃左右，最高使用温度为60℃ 3）缓冲液pH使用范围为2～7 检测器 LC常用检测器： 紫外检测器（包括二极管阵列检测器） 示差折光检测器 电导检测器 检测器 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：比耳定律，A＝KCL 优点：1）对温度和流速不敏感 2）可用于梯度洗提 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 检测器 1）设定时间程序（切换检测波长等） 2）双波长检测 3）比例色谱，初步判断峰的纯度 4）停泵扫描，确定组分最大吸收波长 检测器 二极管阵列检测器（SPD－M10AVP） 二十一世纪标准紫外检测器 色谱定性依据： 保留时间 常规紫外检测器 峰纯度 二极管阵列检测器 检测器 1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰 检测器 原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样 各组分浓度。 优点：通用型检测器 缺点：1）对温度变化敏感 2）不能用于梯度检测 检测器 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的 电导变化来测定电离物质含量。 *离子色谱法中广泛使用的检测器 *对温度变化敏感 数据处理 岛津液相色谱数据处理单元： LC-Solution色谱工作站 CLASS－VP色谱工作站 C－R6A色谱数据处理机 C－R7A色谱数据处理机 C－R8A色谱数据处理机 HPLC Business Dept Shimadzu Corporation 石油醚 碳酸钙颗粒 色素 玻璃柱 溶剂 输液泵 进样器 柱温箱 检测器 数据处理 返回 VP系列输液泵：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵 D泵：并联微体积往复式泵 T泵：串联式往复泵 目的 单元 流速范围 特性和应用 分析 LC-10ADVP 0.001-9.999 超低脉动，适于 半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP 0.001-9.999 非凡的耐用性， 适于常量分析 *所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度 返回 装填状态 手动进样器的原理图 装填状态 样品注入 返回 柱温控制的优点： 返回 ODS柱的使用注意点： *硅胶在pH为3～4时稳定性最好 *碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。 紫外检测器 岛津VP系列紫外检测器功能： 二极管阵列检测器的优点： 示差折光检测器 返回 电导检测器 返回 HPLC Business Dept Shimadzu Corporation * *