透射电子显微镜(2).ppt

* 透射电子显微镜 （Transmission Electron Microscope TEM） TEM具有和光镜相似的结构系统,由电子枪产生的电子射线作为光源 ,由电磁透镜代替光镜中用玻璃制成的聚光镜、物镜和目镜 TEM 镜体结构相当复杂，镜筒内部要求高真空状态 第一节 透射电镜结构和工作原理 一、透射电镜结构 二、透射电镜工作原理★ 第二节 透射电镜样品制备技术 一、超薄切片技术★ 二、特殊组织样品制备 第一节 透射电镜的结构和工作原理 照明系统：电子枪、会聚透镜 镜筒{成像系统：样品室、物镜、中间镜、投影镜 观察记录系统：观察室、底片室 真空系统：机械泵、油扩散泵、真空管等 辅助{电源系统：高压电源、透镜电源、调压器等 水冷系统：循环水泵等 一、透射电镜的基本结构 （一）电子束与电磁透镜 ＆电子束在真空中运动的速度与加速电压有关（阳极）加速电压越高，电子束的波长越短(根据光学阿贝公式原理，一台仪器的成像最高分辨率，约为它使用信息传递媒介波长的一半。电镜之所以能获得很高的成像分辨率，是由于它的电子束波长远较可见光的波长为短） ＆ 电磁透镜的焦距与磁场（线圈组成，当电流通过时产生磁场）强度有关,磁场越强，焦距越短，放大倍率越高 二 、透射电镜的工作原理 （二）电镜图像形成 任何物质都是由原子组成的， 当均匀的电子束穿过样品时会受到 样品上信息的处理多数电子可从原 子和原子之间的空隙穿过，极少部 分电子与原子核和轨道电子发生碰 撞而形成散射电子 散射电子能力强的地方透过电子数目少 打在荧光屏上所发出的光弱，显现为暗区 散射电子能力弱的地方透过电子数目多 打在荧光屏上所发出的光强 显现为亮区 样品结构不同散射电子的能力不同，结果？ 第二节 透射电镜样品制备技术 一、常规样品制备技术 超薄切片技术 ※ 负染技术 二、特殊样品制备技术 电镜酶细胞化学技术 免疫电镜技术 电镜原位杂交技术等 普通光镜切片厚度约5μm左右 — 石蜡切片 透射电镜切片厚度在50nm左右 — 超薄切片 （100nm以下） 目前有关生物体的各种组织、细胞的形态结 构知识大部分是超薄切片技术所提供 一 、超薄切片制备技术 取 材 预固定 后固定 脱 水 浸 透 包 埋 修 块 切 片 染 色 超薄切片技术的基本操作程序 快 尽量保持其生活状态，在1分钟内固定 小 1mm3的小块 轻 不要牵拉、锯、挤压组织 冷 4℃保存 （一）取材 1、固定目的 把在活体状态时的结构尽可能 完整保存下来 2、常用固定剂 ⑴ 戊二醛（ glutaraldehyde ） 　　 对糖原、糖蛋白、尤其是微管、内质网 　　 细胞基质有较好的固定作用 ⑵ 四氧化锇( osmium tetroxide,OSO4 ) 对含蛋白质、脂肪性物质有良好的固定作用 特别对磷脂蛋白膜的结构有良好的保存作用 （二）固定 ⑶ 高锰酸钾 ( potassium permangauate ) 对磷脂蛋白类有特别良好的固定作用 尤其对神经髓脂质的保护更为显著 ⑷ 甲醛（formaldehyde） 对酶活性的保存却优于戊二醛 在电镜细胞化学中常采用 3 固定方式 ⑴ 组织块浸泡固定 取数块1mm3的组织块迅速浸泡于固定液中 ⑵ 体内原位固定 适用于动物实验，将动物麻醉解剖，暴露所 需的组织或器官，立即用预冷的戊二醛滴到 上面直到组织适度变硬