课件：操作说明.ppt

 2008-08-08 新生儿溶血症Coobms试验 Coobms试验 标本要求：婴儿父母，婴儿各1-2 ml 抗凝血。 检测项目：ABO血型，Rh(D)，直抗， 放散，游离试验。 记费标准：200元。 一．实验前准备： 1．1%标准A，B，O 型红细胞悬液 （三人以上混合，洗涤一次）。 2. 1%不完全抗体筛选细胞（O型红细胞）Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ，0.2M 巯基乙醇应用液。 3．打开37℃Diana孵育器，56℃水浴箱， 各离心机电源。 二．新生儿及其父母血型卡、直抗试验1： 1．离心抗凝血标本，取压积红细胞1 ul 加 1 ml 生盐配成1%红细胞悬液（可不洗涤）。 2．血型卡上写好姓名，8孔中加入患者1%的红细胞悬液50 ul。 3．不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。 4．观察血型、直抗试验结果。 注： IgG ：兔多克隆抗- IgG AHG：多克隆抗人球蛋白 二．新生儿及其父母血型卡、 直抗试验2： 姓名 离心 观察血型、 直抗试验结果 患者1%的红悬50 ul 三．放散试验1： 1．取新生儿压积红细胞200 ul洗涤三次。 2．加200 ul生盐混匀在56℃水浴箱10分钟（中间轻轻振荡几次），2500转/分离心3分钟。 3．Coombs卡上做好标记，取上述上清液50 ul加到Coombs卡孔上。 三．放散试验2： 4．加入相应1%标准A，B，O 型红细胞悬液50 ul。 原则： 新生儿血型为A 型，加标准A，O 型红悬2孔； 新生儿血型为B 型，加标准B，O 型红悬2孔； 新生儿血型为AB型，加标准A，B，O 型红悬3孔； 新生儿血型为O 型，加标准O 型红悬1孔； 5. 37℃下孵育15分钟，离心。 6. 观察放散试验结果。 三．放散试验： 新生儿压积 红悬200ul 洗涤三次 压积红:生盐=1:1 56℃, 10min 2500rpm, 3min +1%标准A，B，O 型红细胞悬液50 ul A O 放散 姓名 离心 观察放散 试验结果 37℃, 15min 上清 50ul THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 四．游离试验： 1．Coombs卡上做好标记，加入50 ul新生儿血浆。 2．加入相应1%标准A，B，O 型红细胞悬液50 ul。 原则： 新生儿血型为A 型，加标准A，O 型红悬2孔； 新生儿血型为B 型，加标准B，O 型红悬2孔； 新生儿血型为AB型，加标准A,B,O型红悬3孔； 新生儿血型为O 型，加标准O 型红悬1孔； 4. 37℃下孵育15分钟，离心。 5. 观察放散试验结果。 五．直接抗人球蛋白试验(Cooms)： 在Coombs卡AHG下做好标记。 加入1%被检红悬50 ul。 3. 不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。 4. 观察血型、直抗试验结果。 注： AHG：多克隆抗人球蛋白 六．IgG抗体效价检测： 1.Coombs卡上做好标记。 2.取200ul 孕妇血浆与200ul巯基乙醇应用液等量混匀，37℃水浴1小时，破坏IgM抗A/B抗体。 3.2500转/分离心3分钟，取上清100ul，用生理盐水等比稀释至1：512。 4.在Coombs卡4孔上加入稀释好的第5-8孔50 ul，再加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50 ul。 5.37℃下孵育15分钟，离心。 6.观察放散试验结果。 七．IgG抗体效价检测： 1.Coombs卡上做好标记。 2.主侧：患者血浆50ul ＋ 供者红悬50ul。 3.次侧：供者红悬50ul ＋ 患者血浆50ul。 4.37℃下孵育15分钟，离心。 5.观察放散试验结果。 八．抗体筛查： 1.Coombs卡上做好标记。 2.患者血浆50ul ＋ 1%不完全抗体筛选细胞各50ul。 3.37℃下孵育15分钟，离心。 4.观察放散试验结果。 九．注意事项： 1．红细胞悬液浓度为1%，过高过低可能影 响结果。 2．实验后做好结果的记录和报告，保存血标本在4℃冰箱一周。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑