革兰氏染色小知识.pptx

1 食品安全管理系列教程 广州银筷子科技有限公司编制 FOOD SAFETY 革兰氏染色小知识 一、原理 1。通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色； G+菌细胞壁 一、原理 2。而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经番红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 二、步骤 革兰氏染色法的步骤为：涂片固定结晶紫色染色水洗碘液媒染水洗酒精脱色番红复染水洗干燥观察。1、涂片首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置于载玻片的水滴中与水混合并涂抹开。注意涂抹要均匀平坦，涂抹成直径约为1 cm的薄层。 2、固定将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳；待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，重复操作直到薄层变干。 二、步骤 3、结晶紫染色染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。 4、酒精脱色用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止（大约半分钟），然后立即水洗，并吸干。5、番红复染染色3分钟左右，然后水洗并吸干。6、镜检在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌；菌体显红色的为革兰氏阴性菌。 三、结果 染色结果革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 四、意义 1、鉴别细菌2、选择药物3、与致病性有关革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素；而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖，两者的致病作用不同。 五、注意事项 1、注意涂片不宜过厚，勿使细菌密集重叠，影响脱色效果，否则脱色不完全造成假阳性。镜检时应以视野内分散细胞的染色反应为标准。2、火焰固定温度要适宜，以玻片不烫手为宜，否则菌体细胞变性。3、滴加染色液与酒精时一定要覆盖整个菌膜，否则部分菌膜未受处理，亦可造成假象。 五、注意事项 4、乙醇脱色是革兰氏操作的关键环节。如脱色过度，则G+被误染成G-菌，而脱色不足，G-被误染成G+菌。在染色方法正确无误的前提下，如菌龄过长、死亡或细胞壁受损伤的G+也会呈阴性反应，故革兰氏染色用要对数生长期的幼龄培养物。5、染色过程的时间控制。应根据季节、气温调整。一般冬季时间可稍微长些，夏季可稍微短些。 10 食品安全管理培训系列教程-食品安全基础 感谢收看！ 广州银筷子科技有限公司编制 FOOD SAFETY