课件：肠道传染病的诊断.ppt

* * * 直接分离培养 急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种在选择性培养基上。目前常用的强选择性培养基有TCBS琼脂、碱性琼脂、庆大霉素琼脂等。霍乱弧菌在TCBS上因分解蔗糖呈黄色菌落,此是 WHO推荐使用培养基。 增菌 所有粪便标本都应接种碱性蛋白胨水培养基，放37℃增菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强选择性碱性琼脂和TCBS琼脂平板各两个。 各种培养基上的生长情况 培养基 生 长 状 况 碱性蛋白胨水 生长迅速，培养6-8小时后在液体表面形成菌膜，可进行分离 碱性琼脂平板 菌落呈无色、圆形、透明、光滑、湿润、扁平或稍凸起、边缘整齐、水滴状 庆大霉素琼脂 菌落略带灰色、半透明、扁平、中心有黑灰点。 血平板 形成的菌落较大，ELtor生物型可形成透明溶血环（?溶血）。 TCBS 菌落较大，因分解蔗糖菌落成黄色 疑似菌落初步鉴定 每个碱性琼脂、TCBS琼脂平板上各挑取5个以上(少于5个的全部挑取)疑似菌落接种于营养琼脂平板/营养琼脂斜面或克氏双糖置37℃18-24h纯培养(即每份样品至少从2个分离平板上获得约10株可疑菌落菌株)，取斜面纯培养物进行血清鉴定、并涂片进行革兰氏染色及氧化酶试验等。 挑取可疑菌落作玻片凝集 与O1群多价和单价血清作玻片凝集反应 与O139群抗血清做凝集反应 血清鉴定 自分离培养基上挑取可疑菌落与01群霍乱弧菌多价/单价诊断血清及0139群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集试验。如可疑菌落在血清中很快(一般在10s内)出现肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。可疑菌落较多时，应挑选5个以上的菌落逐个进行玻片凝集检查，必要时，取原划线菌落边缘透明部分再做玻片凝集，均为阴性时方可报告未检出01群及0139群霍乱弧菌。对首发病例菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查。 快速辅助诊断 制动试验 玻片凝集试验 免疫荧光球试验 胶体金免疫层析快速检测 PCR试验 SPA试验等。 制动试验 急性期病人的粪便内含有大量的弧菌，取一滴水样便滴在玻片上直接镜检（最好用暗视野或相差显微镜）可见具有流星状动力的细菌，当加入一滴01群霍乱免疫血清后，运动停止，凝集成块为阳性。 快诊试纸条--胶体金免疫层析快速检测技术 【原理】采用胶体金免疫层析双抗体夹心法，检测标本中霍乱弧菌。以胶体金作为标记物，交联抗霍乱弧菌单克隆抗体，与样品中的霍乱弧菌结合。形成双抗体夹心一步法，呈现出目测可见的红色条带，显色程度与抗原含量成正比。 注： 快诊试纸条：分O1群和O139群 【实验操作步骤】 1、待检样品的处理 1)??????? 直接检测：:水样便直接检测。 2)??????? 增菌检测： 水样便：1-2ml接种于8-9ml碱性蛋白胨水，37℃培养6-8h或过夜。 2、快速检测卡加样： 1)将检测卡放置与洁净、干燥的工作台上 2)实验前，请将试剂恢复至室温 3)用吸管取前增菌液样品2-3滴，加入检测卡一端的加样孔，计时并观察反应结果 4)2-15分钟内观察结果，20分钟之后结果不能判读 【结果判断】 有效结果目测可见有红色条带 阳性结果可见两条紫红色线条：检测线和质控线 阴性结果仅见一条紫红色质控线 无效结果无任何线条出现，说明实验无效 胶体金霍乱检测试剂盒 快速诊断初步报告 1、快诊断实验阳性者同时涂片染色和悬滴法观察，如镜检为革兰染色