胡腊英全自动化学发光免疫分析仪运行原理.ppt

化学发光基本原理 反应体系中的某种物质的分子(反应物、产物、中间体或荧光物质) 吸收了反应所释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光。将化学发光反应应用于分析化学，根据某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定体系的相应组分含量的分析方法叫化学发光分析法。 A + B = C + D*（激发态分子） D*→D + hv（激发态分子D*的光辐射） 化学发光的反应条件 （1）能快速地释放出足够的能量 （化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当，DE=170～300 kJ/mol）；发光位于可见光区； （2）化学反应的能量至少能被一种物质所接受并使之生成激发态； （3）激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态。 化学发光分析法的特点 由于化学发光分析不使用任何光源，避免了背景光和杂散光的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比，因而，化学发光分析法一般都有很高的灵敏度，通常可测定纳克级或皮克级的化学成分。——高灵敏度 测量化学发光强度，多采用光电转换装置，用函数记录仪或数显装置，记录化学发光的相对强度。以最大发光强度(曲线的峰高)定量被测组分的浓度。——光电转换 配备微机系统，自动进样，储存记录，打印结果，使化学发光分析的速度更快。——全自动 化学发光的分类 化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型： 第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的敏感性。 如：化学发光酶免疫测定（CLEIA，与酶标ELISA法类似，即最后一步酶反应所用底物为发光剂 ） 第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。 如：化学发光标记免疫测定亦称化学发光免疫测定（CLIA）、电化学发光免疫测定（ECLI） ABBOTT i?2000SR检测原理 Architect I系统采用化学发光微粒子免疫分析技术（Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay, CMIA）检测样品中的抗原，抗体和分析物。 即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒）特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物，再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成10-甲基吖啶酮，当它恢复到基态时发光，根据发光强度可计算出分析物的浓度 。 CMIA分析成份 磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒）用于特异性的检测被分析物。 吖啶酯标记的连接物 预激发液和激发液 ABBOTT i?2000SR试剂组成 试剂组成 中圈（RI）：包被有抗体的顺磁性微粒子 内圈（R2）：吖啶酯包被的抗体 外圈：样本稀释液 预激发液：1.32%的过氧化氢 激发液：0.35mol./L的氢氧化钠 清洗缓冲液：磷酸盐缓冲液 CMIA分析步骤 1．样品与微粒子结合 在样品检测过程中，微粒子（磁性微粒子包被的捕捉分子）与样品在反应杯中混合，在孵育过程中，样品中的被分析物与微粒子上的捕捉抗原相互反应结合，形成免疫复合物。 2．磁石将磁性微粒子吸附 孵育后，磁石将磁性微粒子（包括特异性的分析物）吸附在反应杯的管壁上，反应复合物被清洗去除未结合的物质，然后继续进行测定。 3．加吖啶酯标记的连接物 反应复合物在反应杯中与吖啶酯标记的连接物反应结合，反应结束后，反应复合物被清洗去除未结合的物质。 4． 预激发液（H2O2）被加入进行本底读数 预激发液具有以下功能： ①建立一个酸性环境，防止能量的过早释放（光发射） ②防止微粒子的凝集 ③将吖啶酯从反应复合物中脱离下来，为吖啶酯的下步反应做准备 然后系统在反应复合物中加入激发液（NaOH），吖啶酯在过氧化物和碱性溶液中发生氧化反应，在碱性H2O2 溶液中，分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm 的光子。 5． 检测被分析物存在的量 要检测被分析物存在的量，CMIA光路系统通过预先确定好的时间读取化学发光发射的量（活动读数），可计算分析物的浓度，或根据Index（截断值）来定性进行判断。 项目运行方法类型 一步法 一步法分析需要29分钟处理时间,其中包括25分钟孵育 二步法 二步法分析需要29分钟处理时间,其中包括22分钟孵育 预先处理法 预先处理法需要对样品自动预先处理再按一步法和二步法分析样品 快速反应一步法 快速反应一步法需要18分钟处理时间,其中包括11分钟孵育 快速反应二步法 快速反应二步法需要18分钟处理时间,其中包括8分钟孵育 一步法 (i?System) 1 ? 在位置1加样品到RV杯中. ?