PCR实验室污染和对策.pdf

PCR实验室的污染与对策 河北医科大学第三医院 冯忠军 PCR技术是一种体外模拟自然DNA复 制过程的核酸扩增技术，该技术通过 重复高温变性、低温退火、中温延伸 等简单的3个温度循环，能将靶DNA扩 增数百万倍，获得极高的检测 敏感性。 30次循环后靶序列扩增的数量 No. of No. Amplicon Cycles Copies of Target 1 2 1 cycle = 2 Amplicon 2 cycle = 4 Amplicon 2 4 3 cycle = 8 Amplicon 3 8 4 cycle = 16 Amplicon 4 16 5 cycle = 32 Amplicon 5 32 6 cycle = 64 Amplicon 6 64 20 1,048,576 7 cycle = 128 Amplicon 30 1,073,741,824 Mullis 在 “偶然想出的聚合酶链反应”一文 中写 : 这种简单得令人惊奇，可以无限量地拷贝 DNA片段的方法是在不可想象的情况下，即驾车行 驶在月色下的加利福尼亚山间公路上时想出来 的”。 PCR发展速度惊人，没有一种技术能与之相比 引用论文最多、应用范围十分广泛。 PCR专利官司斗争不断也是基于其带来的巨大 的效益。 最令人头痛的问题是易污染，极其微 量的污染即可造成假阳性的结果。 如果形成气溶胶污染而扩散，则可引起 整个PCR实验室的污染。 处理方法：极其麻烦，甚至要关闭PCR 实验室。 难忘的1995 年 被称之 为PCR临床检验爆炸年？ 天下大乱！ 天下大治！ 某 验室污染的经历 某实验室曾经遭遇过气溶胶的污染，所 幸的是经过一段时间的处理，最终将PCR 验室污染排除掉了。 （一）实验室情况 l 验室设置 验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增 区三个区，试剂存放在试剂准备区，标本是在标 本制备区处理，处理完的标本置于扩增区上机扩 增。 l使用试剂 试剂是由国内某公司提供的乙型肝炎病毒 (HBV)荧光定量PCR试剂。证件齐全，符合国家要 求。 l操作人员 经过卫生部临检中心组织的理论和操作培训 并通过考试取得合格证。 （二）污染的发现 2004年8月12日，该实验室按正 的操 作规程检测HBV DNA标本，同时设立了阴性 对照和阳性对照(均为试剂盒中配备)，扩 增结束分析结果时，发现HBV DNA所有的标 本及阴、阳性对照均为阳性，提示操作过 程中出现污染，但具体是什么原因引起的 污染还不清楚。 （三）污染源的追踪 出现污染后，工作人员首先考虑可能是 试剂的污