DNA重组技术的基本工具-.ppt

胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来只能从猪、牛等动物的胰腺中提取，产量低成本高。 而微生物生长迅速，容易控制。于是科学家设想，若能将人的胰岛素基因导入微生物体内，并得以表达，就不仅能解决产量问题，还能大大降低生产成本，使药品价格大幅下降。 本节知识内容 限制性内切酶作用过程 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以 ， 然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 作为载体的条件： 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 * 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表 自主学习 A T G C A T G C 连接酶连接磷酸二酯键 DNA连接酶的作用过程： 二、分子缝合针——DNA连接酶 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 作用部位： 是磷酸二酯键（扶手） 不是氢键（梯子） DNA连接酶将两条DNA链连接起来的酶。 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 双链 在两DNA片断之间形成磷酸二脂键 单链 将单个核苷酸加到已存在的核酸片断3’末端形成磷酸二脂键 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 分类 作用 E.coli DNA连接酶 连接酶种类： T4DNA连接酶 核苷酸分子的连接： A T G C A T G C DNA聚合酶连接单链DNA 把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段上 三、分子运输车——基因进入受体细胞的载体 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入受体细胞的工具就是载体。 基因工程的载体被喻为： 分子运输车 基因工程的载体来源： 作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？ 质粒、噬菌体、动植物病毒 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。 有切割位点 能复制并带着插入的目的基因一起复制 质粒——裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 最常用运载体——质粒 实际上在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 1、能自我复制 2、具有一个或多个限制酶切点 3、具有遗传标记基因 4、对受体细胞无害、易分离 5、大小适合，便于操作 质粒作为运载体的条件？ 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 天然质粒的基础上进行过人工改造的 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车”── 限制（性核酸内切）酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 原核生物中分离纯化出来 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 粘性末端 平末端 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 连接黏性末端 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 连接黏性末端和平末端 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 的 能自我复制；有切割位点； 有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离 基础上进行过 * * * 设想一 能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？ 设想二 能否让微生物产生出人的 胰岛素等珍贵药物？ 这些定向改造基因 的设想能实现吗？ 经过多年的努力，科学家终于在20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术