第二十三章 免疫细胞及其功能检验技术.ppt

未转化淋巴细胞 转化的淋巴母细胞 转化率（％） ＝ 转化的淋巴细胞数 计数的淋巴细胞总数 X100％ 培养液 3H-TdR PHA 淋巴细胞 抗凝全血 分离液 离心 过滤 测量放射性 3H-TdR掺入法 灵敏度高 客观性好 原理： 外周血T细胞 PHA 发生增殖 MTT 含蓝色甲颗粒 的T细胞 MTT PHA 有机溶剂 测吸光度（A）值 计算SI判定细胞增殖结果 (SI≧2具有意义) MTT法 操作简便 无放射污染 51Cr释放法 淋巴细胞（CTL） + 含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线 CTL介导的细胞毒试验 原理 根据T细胞活化的双识别原理，用生物工程技术将MHC分子在体外组装，并结合抗原表位肽，形成抗原肽-MHC分子复合物，结合流式细胞仪定量检测抗原特异性T细胞。 T MHC-抗原肽四聚体技术 MHC-肽四聚体技术 淋巴细胞内细胞因子检测 实验原理: 用刺激剂体外激活淋巴细胞，用蛋白转运抑制剂如莫能霉素阻止细胞因子分泌到细胞外，细胞内蛋白质转运方式被打乱，引起细胞因子向高尔基体积聚，用流式细胞仪测定淋巴细胞内的细胞因子种类，确定Th1/ Th2细胞的百分率。 分泌的细胞因子 Thl Th2 IL-2 ++ - IFN-γ ++ - TNF-β ++ ++ IL-3 + ++ GM-CSF + ++ TNF-α - ++ IL-4 - ++ IL-5 - ++ IL-6 - ++ IL-10 - ++ Thl和Th2分泌的细胞因子 二、B细胞数量及功能检测 （一）B细胞数量检测 根据B细胞表面标志进行检测： （1） mIg的检测：免疫荧光、免疫组化 （2） CD分子的检测： 检测CD19、CD20、CD21、CD22、 CD29以及CD5等 （3）小鼠红细胞受体的检测：花环试验 （二）B细胞功能检测 B细胞增殖试验：3H-TdR掺入法、MTT法 （刺激物：小鼠用LPS；人用SPA的金黄色葡萄球菌菌体或抗IgM抗体） B细胞抗体产生能力检测：溶血空斑试验、ELISPOT 经典溶血空斑试验 1. SRBC致敏的B细胞与SRBC在凝胶介质中混匀； 2. 抗体形成细胞( Antibody forming cell, AFC )周围的SRBC与AFC产生的抗体结合而被致敏； 3. 加入豚鼠新鲜补体，致敏SRBC激活补体而溶解，在AFC周围出现肉眼可见的溶血空斑； 4. 计算溶血空斑的数目。 溶血空斑试验 酶联免疫斑点试验 抗体产生 B细胞 抗原包被 酶联抗抗体 凝胶底物 显色 可在单细胞水平上检测B产生抗体和T细胞分泌细胞因子 三、NK细胞数量及功能检测 （一）NK细胞数量检测 根据NK细胞表面标志进行检测： CD分子的检测： 检测CD3、CD56、CD16等 （CD3-CD56+CD16+） （二）NK细胞功能检测 形态学法 酶释