课件：实验十七偶氮胂Ⅲ法测血钙.ppt

可编辑 可编辑 实验十七 偶氮胂Ⅲ法测血钙 血浆中约含钙2.1mmol/(8.4～10.2mg/dl)，以三种形式存在：①非扩散钙(non-difusional calcium)：是指与血浆蛋白相结合的钙，占血浆总钙的45%；②离子钙(ion calcium)：是具有生理活性的部分，约占血浆总钙的50%；③络合钙(chelating calcium)：主要指与枸橼酸结合的钙，是体内钙的一种运输方式，约占血浆总钙的5%左右。钙离子和络合钙都能透过毛细血管壁，故统称为扩散钙。血钙的测定方法很多，一般可分为总钙测定和离子钙测定法。前者包括同位素稀释质谱法(isotope diluting mass spectrometry)、原子吸收光谱法(atomic absorption spectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和络合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的准确测定血浆总钙含量的参考方法，但费用昂贵，不适于常规工作；分光光度法中以甲基百里香酚蓝比色法（methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂Ⅲ比色法（Arsenazo Ⅲ colorimetry）最常用。络合滴定法简便易行，但判断终点受主观因素影响，有被淘汰趋势，但不少基层实验室仍延用。离子选择电极法测定离子钙已在临床广泛应用。分光光度法已被广泛用自动生化分析议分析。 【实验原理】 在碱性条件下，样品中钙与偶氮胂Ⅲ作用生成蓝色复合物，其颜色深浅与钙浓度成正比，通过在660nm波长处测定吸光度的变化值，与经过同样处理的钙校准液进行比较，即可计算出样品中钙含量。 【操作步骤】 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 2.0 2.0 2.0 37℃恒温5分钟 蒸馏水（ml） -- -- 0.02 标准液（ml） -- 0.02 -- 血清 0.02 -- -- 混匀，37恒温2分钟，660nm波长，以空白管调零，测定各管吸光度。 【计算】 样品钙含量（mmol/L）= ×2.50 【参考范围】血清钙：2.1～2.6mmol/L 【临床意义】 （1）低钙血症见于 ①摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻塞性黄疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女；③吸收减少：佝偻病、甲状旁腺功能减退症；④肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合征、肾小管性酸中毒；⑤坏死性胰腺炎。 （2）高钙血症见于 ①摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶等；②原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高；③服用维生素D过多，钙吸收作用增强；④骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多发性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有异位内分泌作用的肿瘤；⑥长期制动引起骨骼脱钙。 【评价】 1. 线性范围：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。2. 精密度：批内、批间平均CV分别≤5.0%3. 准确度：不准确度≤10%4. 试剂空白吸光度值≤0.35。 【注意事项】 1. 样品中钙含量超过5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定2小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有钙污染。6. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。7. 试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。8. 使用肝素作为抗凝剂时浓度不能太高，每毫升血液中肝素浓度应小于50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA等作抗凝剂。 实验十七 钙镁试剂比色法测血镁 【目的要求】 1.掌握比色法测血镁 2.熟悉血镁测定的其他方法 【实验原理】 血清中的镁在碱性条件下，与金属色原染料钙镁试剂（calmagite)反应生成紫红色络合物。颜色深浅与美的浓度成正比，与同样处理的标准品比较，可以求得镁的含量。 【操作步骤】 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 2.0 2.0 2.0 37℃恒温5分钟 蒸馏水（ml） -- --