房磊-冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用.ppt

研究背景---生长因子与创伤修复 研究背景---生长因子与创伤修复 研究背景---血小板与生长因子 研究内容 冰冻干燥血小板的制备及所含生长因子的研究 冰冻干燥血小板促进创伤修复作用的研究: 细胞实验 动物实验 1.冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析 2、血小板促进大鼠慢性难愈合创口修复的研究 * 冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用 研 究 生：房 磊 实验完成人：杜 为 高 峰 房 磊 导 师：韩 颖 研究员 军事医学科学院野战输血研究所 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景 结 论 1 5 研究内容 2 技术路线 3 实验结果 4 血小板 基因重组 生长因子 生长因子 来源 军事医学科学院野战输血研究所 合成 核酸、蛋白质以及其他细胞外大分子物质 趋化 巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等细胞 增殖 成纤维细胞、血管内皮细胞、上皮细胞等修复细胞 血小板 基因重组细胞因子药物在美国已经开始批准应用并取得良好的临床效果。 基因重组药物的缺陷： 1单一生长因子作用有限 2贝卡普勒明 (becaplermin ）效应 军事医学科学院野战输血研究所 军事医学科学院野战输血研究所 血小板中的生长因子 生长因子在创伤修复中的作用 更天然 更适合 血小板创伤修复作用的原理 研究背景---血小板与创伤修复 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景---血小板与创伤修复 血小板创伤修复作用的应用 军事医学科学院野战输血研究所 商品化的PRP制备方法 研究背景---血小板与创伤修复 PRP技术的优缺点 PRP中生长因子的含量是静脉血的几十倍 PRP中各种生长因子是天然的，并且比例符合体内生理水平 PRP中各种生长因子之间存在相互协同作用 PRP 高效 安全 难量化 难储存 PRP在22士2℃条件下振荡保存仅5d PRP中血小板含量因人而异，甚至同一个人在不同时间血小板含量也不同 量足 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景---血小板冰冻干燥保存与创伤修复 军事医学科学院野战输血研究所 冰冻干燥保存：在低温和真空环境中除去血小板保存体系中的自由水和部分结合水，得到粉末状固体，可以长时间贮存，需要使用时进行复水即可。 目前研究 热 点 2006 2001 1995 1956 Klein等首次尝试用冷冻干燥的形式长期保存血小板 Read等用多聚甲醛固定的方法提高血小板在冻干过程中的渗透稳定性。 WoIker等首次使用海藻糖和白蛋白作为冰冻干燥保护剂，在冻干血小板的研究中取得突破性的进展。 哈佛大学医学院的一个研究小组首先报道了冰冻干燥血小板创伤修复作用的研究，目前，这一研究正逐渐兴起，但仍处于实验室水平。国内未见相关报道。 军事医学科学院野战输血研究所 一、冰冻干燥血小板制备及所含生长因子分析 军事医学科学院野战输血研究所 实验结果 军事医学科学院野战输血研究所 冰冻干燥血小板的制备 实验结果 采用本实验室自行研制的小分子糖保护法进行冻干血小板的制备 61.7±10.1 63.5±6.7 65.4±6.6 64.2±9.7 62.7±6.7a 总蛋白 含量 冻干血小板 常温保存20d 冻干血小板 -20℃保存90d 冻干血小板 -20℃保存30d 冻干血小板 -20℃保存0d 新鲜 血小板 保存时间 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 冻干血小板 -20℃保存0d 冻干血小板 -20℃保存30d 冻干血小板 -20℃保存90d 冻干血小板 常温保存20d 新鲜 血小板 与各冻干组比较a P＞0.05 表1 血小板提取液总蛋白含量（mg/ml）（means±SD） 图1 不同保存条件冻干血小板提取液总蛋白含量的测定结果 实验结果 5.87±1.21 501.97±98.37 冻干血小板 常温保存20d 6.04±1.38 534.17±102.38 冻干血小板 -20℃保存90d 5.57±0.96 517.26±95.45 冻干血小板 -20℃保存30d 5.74±1.27 497.74±98.54 冻干血小板 -20℃保存0d 5.67±1.28b 503.81±101.13a 新鲜血小板 TGF-β1（ng/ml） PDGF-BB(pg/ml) 生长因子浓度 组别 与各冻干组比较a P＞0.05；与各冻干组比较b P＞0.05； 表2 不同保存时间冻干血小板生长因子浓度（n=5，means±SD） 实验结果 图2 血小板中PDGF-BB和TGF-β1 二、冰冻干燥血小板促创伤 修复作用的研究 军事医学科学院野战输血研究所 实验结果