家蝇幼虫提取蛋白的抗病毒及抗肿瘤活性研究-农业昆虫与害虫防治专业论文.docx

jJ|Ilrl jJ|Ilrl l l l ll II III II I I I rUI Y20041 99 华中农业杏学学位论文独创譬声明及使用授权书 学位论文 是否必威体育官网网址 藿 如需必威体育官网网址，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 褥使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 研究生签名：7奠壹一 时闭： 2口，，年多月 铲日 学位论文使用授权书 校要求提交学位论文的印劂本和电予版本；学校有权保存提交论文的印厣|版和电予版， 并提供目录检索和阋览服务，可以采用影印．缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 注：必威体育官网网址学位论文(印涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交必威体育官网网址的论 学位敝储橼夕迪 导师够／，～ 文)在解密后适用予本授权书． 签名日期：2 off年z月9 B 签名日期：汐J l阵6月易日 注：请将本袭赢接装订在学位论文的靡页和目录之间． 家蝇幼虫提取蛋白的抗病毒及抗肿瘤活性研究目录 家蝇幼虫提取蛋白的抗病毒及抗肿瘤活性研究 目录 摘要 一l ABSTRACT ．2 第一章文献综述 ．5 1病毒对人类的危害及抗病毒药物的研究现状 5 1．1病毒的危害 ．5 1．2抗病毒药物的研究现状 ．6 2天然抗病毒活性物质 7 2．1抗病毒蛋白 7 2．1．1美洲商陆蛋白 7 2．1．2 MX蛋白 ．．8 2．2其它抗病毒活性物质 ．8 3昆虫抗病毒蛋白的研究进展 一9 ：；．1 Melittin ．．9 ：；．2 Cecropins ．： ．1() ：；．：；Alloferons ．．10 3．4 N—Myristoylated Peptide ．10 3．5蚕体内抗病毒蛋白 11 4抗肿瘤活性物质研究的概况 ．12 5家蝇活性物质的研究现状 ．1 3 6研究目的与意义 。13 第二章家蝇幼虫抗病毒活性蛋白的分离提取及活性检测 15 1材料与方法 。15 1．1供试材料 。1 5 1．1．1 供试虫源 。1 5 1．1．2供试病毒 ．．15 1．1．3供试十日龄鸡胚 ．．15 1．1．4主要试剂 。l 5 1．1．5仪器设备 1 6 华巾农业大学201 华巾农业大学201 l届硕士研究生学位论文 1．2实验方法 ．．16 1．2．1家蝇幼虫活性蛋白的提取 16 1．2．1．1脱脂蝇蛆粉的制备 ．．16 1．2．1．2蝇蛆蛋白的提取 17 1．2．2蝇蛆粗提蛋白对PRV的活性 ．}．．． 17 1．2．2．1 鸡胚成纤维细胞的原代培养 1 7 1．2．2．2病毒滴度的测定 ．17 1．2．2．3蝇蛆粗蛋白的细胞毒性测定 18 1．2．2．4蝇蛆粗蛋白对PRV病毒直接钝化活性作用 一1 8 1．2．2．5蝇蛆粗蛋白处理细胞感染最佳条件 19 1．2．2．6蝇蛆粗蛋白对PRV病毒吸附阶段影响作用 ．．20 2结果分析 20 2．1家蝇幼虫活性蛋白的抗PRV作用 ．20 2．1．1 蝇蛆粗蛋白对细胞的毒性作用 ．．20 2．1．2蝇蛆粗蛋白对PRV病毒直接钝化作用 22 2．1-3蝇蛆粗蛋白处理细胞感染最佳条件 22 2．1．4蝇蛆粗蛋白对病毒吸附阶段的影响作用 23 3讨论 ．．25 第三章家蝇幼虫抗病毒活性蛋白的纯化及抗肿瘤A549细胞活性检测 27 1材料与方法 。27 1．1供试材料 ．27 1．1．1供试虫源 一27 1．1．2供试病毒及肿瘤细胞 27 1．1．3供试十日龄鸡胚 ．27 1．1．4主要试剂 一27 1．1．5仪器设备 ．28 1．2离子交换色谱DEAE．52柱层析纯化粗提蛋白 一28 1．2．1 DEAE．52柱层析材料活化 ．．28 1．2．2平衡 一29 Ⅱ 家蝇幼虫提取蛋白的抗病毒及抗肿瘤活性研究1．2．3 家蝇幼虫提取蛋白的抗病毒及抗肿瘤活性研究 1．2．3 装柱 。29 1．2．4上样洗脱 29 1．2．5样品浓缩 。29 1．3纯化蛋白抗PRV活性 ．30 1．3．1纯化蛋白对CEF细胞的毒性 30 1．3．2纯化蛋白的抗PRV活性 ．30 1．4纯化蛋白对肿瘤细胞A549抑制作用 30 1．4．1 肿瘤细胞A549的传代培养、冻存及复苏 ．30 1．4．2 纯化蛋白的对肿瘤细胞A549抑制活性 。3 1 2结果分析 3 l 2．1 离子交换色谱DEAE．52柱层析纯化结果图谱 。3 1 2．2纯化蛋白抗PRV活性 ．霄 32 2．2．1 纯化蛋白对CEF细胞的毒性 一32 2．2．2纯化蛋白的抗PRV活