急性弓形虫小鼠感染模型的建立与抗动物弓形虫病药物的初步筛选-预防兽医学专业论文.docx

会签名表急性弓形虫小鼠感染模型的建立与抗动物弓形虫病药物的初步 会签名表 急性弓形虫小鼠感染模型的建立与抗动物弓形虫病药物的初步 论文题目 筛选 论文作者 曾艳波 专 业 预防兽医学 研究方向 《融 动物寄生虫 指导教师 黄兵研究员 培养单位(研究所、中心) 隆翱鳓 专蜒镊、，移 渤 姓名 职称 单 位 ＼ _—， 范红结 教授 南京农业大学 预防兽医学 | 评 阅 丁铲 研究员 上海兽医研究所 预防兽医学 | 人 笈 口 辩 生物化学 主 蔡幼民 研究员 上海兽医研究所’ 与分子生物学 狠刖 席 李利珍 教授 上海师范大学 预防兽医学 春州≮ 答 钱曼 研究员 华东师范大学 生物化学 铆 与分子生物学 辩 朱淮民 教授 第二军医大学 预防兽医学 赫 I 委 王权 副研究员 上海兽医研究所 预防兽医学 王施∥ 口 贝 会议记录(秘书) 顾惠明 论文答辩时间地点 201 1年6月13同，上海兽医研究所A309室 独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 ．果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了 明确的说明并表示了谢意。 研究 ：咯毒歌硌 帆洲序占月吵 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科 学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不 同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 I必威体育官网网址的学位论文在解密后应遵守此协议) 划倘利签 丰邑 时间：O ol(年占月f亡日 师滏沼▲ 愀馋。^盆， 时间：矽，f年易月多日． 弓形虫病是一种重要的机会致病性人兽共患寄生虫病，能在人和多种哺乳动物之间传播。动 弓形虫病是一种重要的机会致病性人兽共患寄生虫病，能在人和多种哺乳动物之间传播。动 物感染后不但会影响生产性能，还将会成为人类弓形虫病的传染源，因此，对该病的防治具有重 要的经济学价值和公共卫生学意义。本研究通过建立急性弓形虫小鼠感染模型后，进行抗弓形虫 药物的筛选，拟发现用于动物弓形虫病防治的药物，并对有效药物的抗虫机制进行初步研究，为 临床上用于治疗动物弓形虫病提供理论依据。 1．弓形虫复苏方法及虫体毒力的摸索及急性弓形虫小鼠感染模型的建立 通过对弓形虫株经不同保存时间及复苏条件后对小鼠致病性的研究，评价虫体保存方法。使 用液氮冻存和体内传代法，摸索出了得到毒力稳定的虫体最佳保存时间、复苏代次与接种剂量。 在此基础上，确立了急性弓形虫小鼠感染模型：使用本实验室保存半年以内的弓形虫RH虫株速 殖子，经小鼠体内传代2次后，腹腔接种超过4 000个虫体／鼠／o．2 mL(Ia讧系、体重20-24 g)， 将保证所有小鼠在6-10 d内全部死亡。通过模型的建立，为后续弓形虫虫体生物学和药物筛选研 究奠定了基础。 2．抗弓形虫病药物筛选的研宄 鉴于目前无专用于动物的抗弓形虫病药物，本研究拟通过选用11种己用于抗动物其它原虫 病及其病原微生物的药物，来进行抗弓形虫病的研究。发现原用于抗动物球虫病的药物一磺胺氯 吡嗪具有很好的抗弓形虫效果，能明显减少弓形虫在小鼠体内的生长、繁殖，可保护50％以上的 小鼠免于死亡并长时间存活，并无法检测到虫体。 3．磺胺氯吡嗪对弓形虫速殖子超微结构的影响 弓形虫速殖子经磺胺氯毗嗪溶液处理后，通过扫描电镜与透射电镜观察虫体结构的变化。在 扫描电镜下，药物处理后的虫体大小不均，细胞膜凹凸不平、皱缩呈现不完整，部分虫体出现破 损、崩解，虫体反光度不均一等。在透射电镜下，药物处理后，部分虫体发生崩解，虫体细胞膜 和核膜结构损坏；致密斑颗粒数量明显减少，细胞质发生均质样改变，细胞质中出现许多空泡； 细胞核发生异染色质化，染色质边缘与核膜分离并出现空泡；顶端类锥体结构模糊，出现类似多 细胞生物的凋亡特征。 4．磺胺氯吡嗪处理前后弓形虫速殖子消减文库的构建 以正常弓形虫速殖子cDNA作为Driver(驱动组)，分别以磺胺氯吡嗪、磺胺嘧啶+乙胺嘧啶 处理速殖子cDNA作为Testef(实验组)，构建了2个消减文库(TI．1、T2．I)，经鉴定文库重组 率超过85％，片段长度大小不一，均在250～750 bp范围内，后续基因功能分析有待进一步研究。 关键词t弓形虫，动物模型，磺胺氯吡嗪，超微结构，抑制性消减杂交库 AbstractToxoplasma Abstr