家鸡肝脏中microRNA的克隆及其靶基因预测-生物化学与分子生物学专业论文.docx

万方数据 万方数据 郑 重 声 明 本人的学位论文是在导师指导下独立撰写并完成的，学位论文 没有剽窃、抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为，否 则，本人愿意承担由此而产生的法律责任和法律后果，特此郑重声 明。 学位论文作者(签名)： 2014 年 5 月 30 日 I 学位论文使用授权书 本论文作者完全了解学校关于保存、使用学位论文的管理办法 及规定，即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印 件和电子版，允许论文被查阅和借阅，接受社会监督。本人授权西 北师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入学校有关数 据库和收录到《中国硕士学位论文全文数据库》进行信息服务，也 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存或汇编本学位论文。 本论文提交□当年/□一年/□两年/□三年以后，同意发布。 若不选填则视为一年以后同意发布。 注：必威体育官网网址学位论文，在解密后适用于本授权书。 作者签名： 导师签名： 2014 年 5 月 30 日 II 目 录 中文摘要V AbstractVI 第一章 绪 论 1 HYPERLINK \l _TOC_250013 miRNA 简介 1 HYPERLINK \l _TOC_250012 miRNA 概述 1 HYPERLINK \l _TOC_250011 miRNA 的生物发生 1 HYPERLINK \l _TOC_250010 miRNA 的作用机制 2 HYPERLINK \l _TOC_250009 miRNA 的基因结构特征 3 HYPERLINK \l _TOC_250008 miRNA 研究进展 3 HYPERLINK \l _TOC_250007 miRNA 的表达及其调控 3 HYPERLINK \l _TOC_250006 miRNA 与胚胎干细胞的增殖分化 4 HYPERLINK \l _TOC_250005 循环 miRNA 与肿瘤 5 HYPERLINK \l _TOC_250004 miRNA 与其它疾病及诊断 6 HYPERLINK \l _TOC_250003 miRNA 与生物进化 9 HYPERLINK \l _TOC_250002 miRNA 研究方法 10 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.3.1 生物信息学方法预测 miRNA 序列 10 1.3.2 分子生物学方法 11 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.3.3miRNA 靶基因的预测及鉴定 11 1.4 课题的目的与意义12 第二章 家鸡肝脏 miRNA 的克隆 14 2.1 材料与仪器 14 2.1.1 实验材料 14 2.1.2 主要的酶和试剂 14 2.1.3 相关缓冲溶液和试剂的配制 14 2.1.4 实验仪器 16 2.1.5 引物合成 16 2.2 实验前的准备工作16 2.3 实验方法 17 2.3.1RNA 的提取 17 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 提取的完整性 18 cDNA 的制备 18 PCR 扩增检测模板的制备效率 21 2.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 21 2.3.6miRNA 的克隆测序 22 2.4 测序结果分析 23 2.5 实验结果 23 2.5.1 目的条带的分离 23 III 2.5.2 目的条带的连接转化24 2.5.3 交错 PCR 鉴定阳性克隆 24 2.5.4 序列分析 25 2.6 讨论28 第三章 miRNA 序列的靶基因预测29 3.1 实验方法 29 3.1.1miRNA 的靶基因预测 29 3.1.2 靶基因的功能分析30 3.2 实验结果 30 3.2.1miRNA 的靶基因预测结果 30 3.2.2 靶基因的功能分析结果 30 3.3 讨论31 结语与展望 33 参考文献34 科研成果VII 致 谢VIII IV 中文摘要 microRNAs(miRNAs)是近年来发现的一种非编码的小 RNA，长度仅 18-24 个核苷酸左右，普遍介导基因转录后的调节，参与调控机体各种生理进程。 miRNA 与 疾 病 如 肿 瘤 的 发 生 发 展 密 切 相 关 。 研 究 发 现 血 液 循 环 中 也 存 在 miRNA，循环 miRNA 可以作为肿瘤无创诊断的生物学标志物。目前对未知 miRNA 序列的发现主要以生物信息学预测为主，而直接克隆法较少见。 运用 RNA 反转录 5末端的转换模板技术（ Switching Mechanism At 5end of the RNA Transcript, SMART），对鸡肝脏中的 microRNA 进行了筛选分离， 获取了新的 microRNA 序列。实验中，首先给 mi