专题3 植物的组织培养技术.ppt

专题3 植物的组织培养技术 四、结果分析与评价 1、外植体被污染的原因： (1)材料的选取应加以选择，老的材料比幼嫩的材料带菌多，田间比温室生长的材料带菌多。 (2)消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，对材料内部所带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解决。 (3)人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌；手接触材料或器皿边缘，使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造出交叉污染；接种室空气污染等。 2、(1)外植体到愈伤组织一般需要20-30d； (2)愈伤组织培养成根或芽时，注意细胞分裂素和生长素的浓度比。 3、茎段上逐渐长出乳白色或黄白色的愈伤组织。 * * * 课题1 菊花的组织培养 植物常见的无性繁殖方法： 组织培养 营养繁殖 扦插 嫁接 压条 扦插 嫁接 压条 基础知识 一、植物组织培养的基本过程 外植体 细胞 分裂 愈伤组织 分化 根或芽 移栽 植物体 脱分化 再分化 二、影响植物组织培养的因素 1、内因：不同的植物组织、同种植物材料的年龄、保存时间长短、部位等都会影响实验结果。 2、外因：外植体对营养、环境等要求特殊，需要配制适宜的培养基，常用的一种培养基是--- (1)矿质元素：大量元素和微量元素 (2)有机物：维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇、蔗糖、琼脂； (3)植物生长调节物质(植物激素) (4)pH (5)温度 (6)光照 植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。 MS培养基 三、菊花组织培养的实验操作 1、MS固体培养基的配制 (1)母液的配制和保存 无机物中的大量元素可浓缩10倍，微量元素可浓缩100倍，维生素、激素和用量少的有机物可配制成1mg/mL的母液。 (2)培养基配制程序 配制培养液?熔化琼脂?调pH值(5.8左右)?培养基分装?高压蒸汽灭菌。 2、外植体消毒： (1)选材：选取菊花茎段生长旺盛的嫩枝。 (2)消毒：流水冲洗?加洗衣粉?流水冲洗?70%酒精?无菌水清洗?无菌吸水纸吸干?0.1%氯化汞浸泡?无菌水清洗3次。 3、接种 (1)接种室消毒 (2)无菌操作的要求 (3)材料的切取和接种 70%酒精擦拭工作台 所有操作都在酒精灯旁进行，每次使用器械后，都用火焰灼烧灭菌。 4、培养 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒，培养温度控制在18-22℃，且每日用日光灯光照12h。 5、移栽 6、栽培 将幼苗移植到消毒过的蛭石或珍珠岩等环境生活，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。 适时浇水、施肥，直至开花。 蛭石是一种天然、无毒的矿物质，具有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。 珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，因其具有珍珠裂隙结构而得名。 在农林园艺方面，用于土壤改造，调节土壤板结，防止农作物倒伏，控制肥效和肥度。 练习 1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。 右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答：　(1)步骤①是 ，最常用的方法是 。　(2)步骤③一般常用的化学试剂是 ，目的是 。　　 (3)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是 ，其中步骤④相当于 ，步骤⑤相当于 。 (4)植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使　　　　　能够在新的植物体上有所表现，其根本原因是　　　　　 　　。 去掉细胞壁，分离原生质体 酶解法 聚乙二醇 (PEG) 诱导植物原生质体融合 植物组织培养 脱分化 再分化 远缘杂交亲本 的遗传特征 杂种植株获得双亲的遗传物质 *