应用微量玻片凝胶双扩散技术鉴定.PDF

维普资讯 292 龠毒拳囊；I 3，l●80 Vif●l。li●‘5iliet 应用微量玻片凝胶双扩散技术鉴定 马铃薯卷叶病毒 侯燕军 张鹤龄 (内蒙古大学生物系，呼和梧特 ) 提 要 应用常规免疫双扩散不能鉴定马铃薯植株中的卷叶病毒 (PLRV)。我们用微量玻片 凝腔双扩散技术对马锋薯檀株汁液 中的PLRV进行了鉴定。试验说 明．用这种方法可测 出马 锋薯茎的汁液最高稀释度为1：4，微量玻片凝肢双扩散与普通免疫双扩散灵敏度 的 比较 试验表明，两者可鬣l出提纯 PLRV的最低浓度分别为 1 g／ml和 6 g／ml，但后者 不 能测 出植物汁液 中的PLRV。撇量玻片凝腔双扩散是 目前能够用于捡删惑病植物什液 中 PLRV的最倚便易行和可靠 的血清学方法。 关蕾饲：马铃薯卷叶病毒；微量玻片凝腔双扩散 马铃薯卷叶病毒一直是 马铃薯病毒病防治的主要对象。早期 ，人们只能利用蚜虫接种 指示植物的方法进行鉴定，但该法检测时间较长，且受温室面积 介体饲养 等 条 件 限 制，也不适宜进行大量样品鉴定。 自从有人成功地制备出PLRV高效价抗血清 以来 …，人们就试图建立 有效的 PLRV 血清学鉴定方法。由于PLRV在感病植物体 内含量极低，只有高灵敏度的血清 学方 法 才适用于 PLRV诊断。近十年来 ，酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫吸附电镜 (ISEM) 这两种血清学方法 目趋成熟 ，是灵敏、快速，有效的PLRV鉴定方法 ]。特别是ELISA 很适合大量样 品检测。但这两种方法均要求有特殊的实验设备 ，不 便 于 推 广 应 用 。 1958年，CrowIe在普通免疫双扩散 (OuchterIonyphtctechni~tue)的基础 上 建立 了新型的微量玻片凝胶双扩散技术 ，该技术除保持原来免疫双扩散的操作简便、分辨 率高，样品用量少等优点外，还显著提高了灵敏度。casman等用它测定了葡萄 球 菌肠 毒索，灵敏度达到0．1／*~／ml，为普通免疫双扩散灵敏度的5．0—20O倍 。后来 ，这 项 技术成为美国食品与药品管理局鉴定肠毒素的标准方法 “。微量玻片凝肢双扩 敝 技 术 还 曾被用于研究大麦黄矮病毒 (BYDV)三个分离物之间的血清学关系 ““，能够测出提 纯BYDV的最低浓度为2．5~／g／m|。但是，由于试验 中须用提纯的 BYDV才可 得到 确定 的结果，因而这项技术还未能用于 田间样品的常规鉴定。 现 已证 明，普通免疫双扩散不能用来检测感病植物汁液 中的 PLRV，只有用高度提 纯的PLRV才 能得到可见反应”。但从未有人将微量玻片凝胶双扩 散这 种比ELISA和 本文于19B8年 1月19目收到 感谢内蘸古商拴局甄宏太先生热情提供加样板摸型及对这项试验柏指导和帮助． 维普资讯 病毒学杂志 3，1919 293 TirOI。5i●● $1alea ISEM简便得多的技术用于 PLRV诊断。我们将R．W．Bennett描述的方法 “。稍加改进， 成功地用微量玻片凝胶双扩数做了马铃薯病株汁液中的PLRV测定。本文报告这项试验 结果 。 材 料 与 方 法 1．檀翱材料 供测定 的马铃薯为温室 中经蚜虫接种 PLR~的植株 。PLRV的繁殖寄主为紫花 球果 曼陀罗 (Daturatatula)o 2．病毒提鲰 按照盂清与张鹤龄描述的方法Il】，由紫花球果曼陀罗材料 中提纯PLRV