微生物基本操作规范.ppt

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色 革兰氏染色阳性球菌（紫色） 注意事项 1．革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 2 ．选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 3.干净的玻片、热固定、每一步水洗要彻底并且吸干等也是实验成功的关键。 鞭毛 化学组成： 鞭毛蛋白 功能： 运动器官 与致病有关 鉴定分类细菌 荚膜 化学组成： 多糖或多肽 功能： 抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用 芽孢 脱水而成，为细菌休眠形式 功能与医学上意义： 对外界的抵抗力增加 可发芽成繁殖体有致病性 有鉴别作用 应以杀死芽胞为灭菌效果的指标 菌毛 化学组成： 菌毛蛋白 种类与功能： 普通菌毛—与致病有关 性菌毛—与遗传变异有关 4.3 微生物的培养 研究和鉴定细菌时所提到细菌的特征指的是细菌菌落的特征，而不是单个细菌的特征。大量食品微生物的质量检测是对可见菌株的检测，现在衍变到给待检测细菌提供适当的条件使之代谢繁殖后再进行检测。因此在细菌学研究中，最基本的要求是有能促使单个细菌生长和繁殖的物质和方法。能给细菌提供适当生长环境的营养物质称为培养基。 根据接种培养方式的不同，可将培养基以多种形式分装到试管、三角瓶或螺帽瓶中，试管或三角瓶的瓶口可用适当的棉塞、金属帽、塑料帽等盖紧。螺帽的优势是能够阻止蒸汽蒸发，避免培养基在保存过程中干燥。 4.3.1 培养的类型 1.液体批量培养：在液体培养基中培养，培养过程不需要加入新的培养基。 2.琼脂斜面培养：在试管中装入约5mL固体培养基融化后摆成斜面冷却。将接种物涂布到斜面或用接种环在斜面上划线。 3.穿刺培养：将含琼脂培养基的试管或瓶子垂直放置，使培养基凝固，用接种针挑取少量接种物垂直穿入至容器的中部。 4.半固体培养：菌株生长的培养基含有足够的琼脂（0.02%~0.3%）使其有一定的黏度，但却没有完全固化。 5.振荡培养：用摇床进行微生物振荡培养。 6.平板培养：平板划线法、倾倒平皿法。 根据培养时是否需要氧气，可分为： 1.好氧培养： (1)固体表面培养法 ：斜面、培养皿、克氏瓶等 (2)液体培养法：静止、摇瓶振荡 2.厌氧培养： (1)深层穿刺培养 (2)化学吸氧与深层穿刺相结合 (3)抽气法：干燥器、简易的真空和气体交换法、厌氧罐 4.3.2 微生物的培养方法 5.1　显微操作 显微镜是微生物检验中最常用的精密光学仪器。 显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。 食品微生物检验中最常用的是普通光学显微镜。 显微镜的使用方法 用光学显微镜观察微生物形态时，一般遵循先低倍镜观察，后高倍镜观察，再油镜观察 。 　　 低倍镜操作方法 1.两眼从侧面注视 低倍物镜对准通光孔，使用粗调焦螺旋将镜筒自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距2～3mm时停止； 2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止； 3. 再用微调焦螺旋调至清晰。 注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察显微镜时，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物镜的危险。因此，用细调焦螺旋调节视野使其更清晰 高倍镜操作方法 1.将低倍镜观察到的目标移动至视野中央； 2.将低倍镜镜头转换成高倍镜镜头。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，因此一般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面； 3.用微调焦螺旋调至清晰。观看的物体数目变少，但是体积变大。 注意：高倍镜观察时，光线需增强。 油镜操作方法 1.将高倍镜观察到的目标移动至视野中央； 2.将高倍镜镜头挪开，于载玻片上滴一滴香柏油； 3.将油镜镜头移动至视野，让油镜镜头浸入香柏油（至油晕不再扩大为止）； 4.用微调焦螺旋调至清晰。 注意：油镜的操作需要较强的关线，故需将光线调至最强。 用10倍和/或40倍物镜为随后的高倍油镜（90倍或100倍）选择合适的视野（油镜镜筒上通常刻有H.I.OIL或OEL等标志） 油镜用后的处理： 第一遍：用擦镜纸拭去镜头上的油； 第二遍：用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去头上残留的油迹； 第三遍：再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。 普通显微镜的保养 (1)