PCR检验质量控制.ppt

3） 22S 有两种表现： l同批两个控制品结果同方向超出2S限值。 或同一控制品连续两批控制结果同方向超出2S限值。 属系统误差失控。 ppt课件 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 +3S +2S +1S 均值 -1S -2S -3S 22S 失控规则 22S失控规则示意图 22S 失控规则 ppt课件 ? 4） R4S 在同一批中两个控制结果差超出4S范围，其中有一个超出了+2S限值，另一个超出了?2S限值。或其中一个超出了＋1.5S，另一个超出了－2.5S限值属随机误差过大，为失控。 ppt课件 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 +3S +2S +1S 均值 -1S -2S -3S R4S 失控规则 R4S失控规则示意图 ppt课件 5） 41S 有两种表现： 包括出现警告在内的这个超出2S的控制结果，这个控制品前3次结果均和这个控制结果在同方向超出+1S或 ?1S范围。 l 包括出现警告在内的这个超出2S的控制结果，这个控制品前1次结果，均同方向超出+1S或?1S范围；另一个控制品的这两次结果也是同方向超出+1S或?1S范围。 属系统误差失控。 ppt课件 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 +3S +2S +1S 均值 -1S -2S -3S 41S 失控规则 41S 失控规则 41S失控规则示意图 ppt课件 6） 10 连同出现12S警告的这个结果，另外还有两个控制品的结果，在前几批及本批结果中，有连续10次在 的一侧。 属系统误差失控。 ppt课件 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 +3S +2S +1S 均值 -1S -2S -3S 　失控规则示意图 失控规则 ppt课件 失控原因分析—阳性质控样本常见的失控原因 核酸提取中的随机误差。如核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等。 仪器的问题。如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致性等。 试剂的问题。如Taq酶和/或逆转录酶的失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。 ppt课件 失控原因分析—阴性质控样本的失控原因 扩增产物的“污染” 临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉 “污染”. ppt课件 上 海 市 临 床 检 验 中 心 Shanghai Centre for Clinical Laboratory * 1）????? 10 连同出现12S警告的这个结果，另外还有两个控制品的结果，在前几批及本批结果中，有连续10次在的一侧。属系统误差表现，失控。 PCR检验质量控制 主讲人：姜锐 ppt课件 实验室设置要求 四个区域（试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区）必须是互相独立的 各区间不能直通，应有缓冲间 应有充分合理的空间、良好的照明、通风和空调设备(不能使用中央空调) 标本制备区有生物安全柜、冲眼器 除移动紫外灯外，各工作区域内应有固定于房顶的紫外灯 传递窗 ppt课件 传递窗 传递窗 ppt课件 实验室管理 进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制，防止患者和其他非相关人员的随意进出 不同工作区域内的设备、物品不得混用 ppt课件 临床基因扩增检验质量控制 分析前—患者准备、标本（采集、运送、验收、保存）、医生报告单申请 分析中—样本分样、仪器、核酸提取、核酸扩增、产物分析、检测的有效性判断 分析后—试验报告、报告传递、结果的接收、结果的审核、结果解释 ppt课件 标本 标本采集时间对扩增检测结果的影响 标本的类型和采集量 采样及运输容器 采样质量的评价 标本采集中的防污染 ppt课件 标本采集时间 1、血清（浆）：无特殊要求 2、如用泌尿生殖道分泌物做CT项目：应在抗生素应用前或停药两周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集 3、如用痰做TB：应在抗结核药物应用前或停药两周后采集标本，如不能停用抗结核药物，应于下次抗结核药物应用前采集。 ppt课件 标本采集量 标本的类型和采集量应根据所测病原体而定。 血浆：HBV,HCV 全血：EB 生殖道分泌物：CT 痰液，肺泡灌洗液：TB ppt课件 采样容器 采样所用的抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。如全血、骨髓和血浆标本，用EDTA抗凝，不使用肝素，因其是 Taq酶的强抑制剂，且在核酸提取过程中很难完全去除。 使用玻璃器皿，必须为密闭的、必须经高压灭菌，以使可能存在的RNase永久性失活。 ppt课件 标本验收、拒收 血液标本：溶血、严重脂血等应拒收 泌尿生殖道分泌物：镜下观察到上皮细胞存在。 痰液：镜下观察上皮细胞很少，一般10个，白细胞一般25个。 ppt课件 标本运送 实验