课件：媒介生物的抗药性监测浙江省疾病预防控制中心任樟尧精.ppt

谢谢！ THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 蛹期：三令幼虫成熟后（约一周），返回饲料缸表面化蛹。化蛹时，幼虫先缩成团，24小时后，变红褐色蛹，后再变成黑褐色。蛹期5天左右开始羽化，移入饲养笼内饲养。 蚊虫饲养 成蚊饲养 通常用蚊笼饲养，每笼可养成蚊500只左右。笼内放入用5%葡萄糖液浸透的脱脂棉一小杯作为饲料，每1-2天更换一次。成蚊在羽化后3-5天多数已完成交配，此时即需供雌蚊吸血。供血时，用体重25g左右的小白鼠，使其腹部向上固定在铁板架上，剪去腹毛，放入笼内喂血12小时。雌蚊吸血后，在25-28℃下约3-4天产卵。此时在笼内放入清水一杯，供产卵用。每日在水杯中取出卵块，移入幼虫饲养盆的水中。 幼虫饲养 饲养幼虫的搪瓷盆应经常保持清洁，固定专用。每只幼虫饲养盆放入幼虫约1500-2000条。饲养用的自来水，必须隔夜脱氯。幼虫饲料用面粉2份，肝粉1份的混合饲料。以揉松的毛笔蘸取少许混合饲料均匀撒布于水面，每日加饲料1-2次。以不使饲料过剩为度。幼虫经7-10天开始化蛹，化蛹后，用吸管将蛹移入含水约50ml的杯内，将蛹杯置蚊笼内，经2-3天即羽化成蚊。 蟑螂饲养 成虫及若虫的饲养 成虫及若虫按不同龄期分别于饲养缸内进行饲养。缸内放入2个玻璃平皿，其中1个盛饲料，另1个盛含水的脱脂棉，第2天更换1次，饲料可用饼干，饲养缸内可放若干硬纸盒，供蟑螂栖息活动。 产卵及孵化 将快要产卵的雌虫移入产卵孵化器的小盘内，同时放入盛有饲料及饮水的平皿和14目电镀铁纱卷各1个，供雌虫食料和栖息产卵之用。每日观察1次，将已产完卵的雌虫取出再放入另一些将产卵的雌虫。同时更换大盘内供若虫栖息的纸卷，将其中的若虫移入饲养缸内单独饲养。 注意事项 1 饲养室必须保持整洁。 2 饲养室饲料要防止霉菌污染。 3 饲养室必须密封，严防试虫交叉、外逃。 4 严禁药物、接触过药物的器材放入饲养室和在饲养室周围喷洒药物。 监测药剂 淡色/致倦库蚊的监测药剂 拟除虫菊酯类：高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯；有机磷类：敌敌畏、倍硫磷、双硫磷、杀螟硫磷；氨基甲酸酯类：仲丁威；有机氯类：DDT、三氯杀虫酯。 家蝇的监测药剂 拟除虫菊酯类：高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯；有机磷类：敌敌畏、毒死蜱、甲基吡恶磷；氨基甲酸酯类：残杀威；有机氯类：DDT。 溶剂：以丙酮（分析纯）作溶剂。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 抗药性测定参考浓度： 淡色/致倦库蚊自然品系抗药性测定（LC50）的参考浓度：DDT1.1 mg/L、三氯杀虫酯0.50mg/L、敌敌畏0.750mg/L、仲丁威0.75mg/L、二氯苯醚菊酯0.02mg/L、溴氰菊酯0.0010mg/L、右旋丙稀菊酯0.15mg/L、高效氯氰菊酯0.010。 家蝇自然品系抗药性测定（LD50）参考浓度：胺菊酯1.150μg /只、三氯杀虫酯5.50μg/只、敌敌畏为0.70μg/只、仲丁威0.75μg /只、二氯苯醚菊酯0.060μg/只、溴氰菊酯0.025μg /只、右旋丙稀菊酯0.450μg /只、高效氯氰菊酯0.075μg/只。 测定方法 蚊幼虫的抗药性测定 蚊幼虫的测定：采用药液浸渍法（WHO推荐方法），以4龄初期幼虫为测试对象，测定半数致死浓度（LC50）。 器具：50ml、500ml容器，1ml、5ml刻度移液管。 环境条件：温、湿度 试虫：正常品系、自然品系、龄期等 浓度的设定：根据上述提供的半数致死浓度参考数据，各测试单位在正式测试前，需进行一次预测，根据预测结果，按等差或等倍设定实验所需浓度（设置5-7个系列浓度）。 测定步骤： 取50ml容器若干只，先放入适量的脱氯水（45ml左右），用吸管吸取四龄期幼虫20-25条，放入幼虫后，用脱氯水补至50ml。 取250-500ml容器若干只，先在每只容器的边缘粘贴一小块胶布，注明测试药物名称和浓度值。 在每只容器内加脱氯水150ml。然后根据设定的不同浓度的丙酮药液，用刻度移液管吸取药液分别加入容器内，用玻璃棒从低浓度向高浓度逐一搅拌均匀，把50ml容器内的幼虫轻轻地分别倒入500ml容器内，合计成200ml水溶液，设以200ml脱氯水和加入与药液等量的丙酮液作对照，在实验室相应条件下，放置24h。24h后检查记录各系列浓度的幼虫死亡数。同一个测试浓度重复4-5次，供试虫数共计100条。 死亡判断标准：检查死亡数时，可用尖头镊子或昆虫针轻轻触动幼虫头部和尾部，不动者为死亡，只是震颤也视为死亡。如果有化蛹的应该剔除，若化蛹率超过10%，对照组死亡率超过20%以上者，试验视为无效，整个实验应重做。。 结果处理：将测试所获得