EB病毒检测技术进展和临床应用.ppt

慢性活动性EBV感染, CAEBV chronic active EBV infection 1975年Horwitz首次描述一些持续性IM患者血清存在高滴度的抗EBV-VCA和EA抗体 1982年Tobi进一步描述并证实该病 1984年被称为慢性单核细胞增多样综合征 1986年被定义为慢性症状性EBV感染 1991年被称为慢性活动性EBV感染 CAEBV 发生于儿童或年轻成年人 该病表现为慢性或反复的单核细胞增多样症：发热、肝脾肿大、持续性肝炎、广泛性淋巴结肿大 EBV感染的NK和T细胞克隆扩增在CAEBV具有重要意义 通常是一种肿瘤前状态或者与严重免疫缺陷有关，可进一步引起EBV相关的T/NK细胞增殖性疾病 预后差，病死率高 CAEBV的诊断标准 1）持续性或反复发作的IM样症状 2）异常升高的抗VCA-IgG和EA-IgG 和/或受累组织包括外周血检测到EBV基因组 3）慢性疾病不能以其他已知的疾病解释 Okana M, et al. Proposed guidelines for diagnosing chronic active Epstein-Barr virus infection. America J Hematol.2005,80:64-69 Hydroavacciniforme牛痘样水疱 hypersensitivity to mosquito bites CAEBV的诊断标准(1) 临床症状 持续性或反复发作的IM样症状 发热、淋巴结肿大、肝脾肿大 并发症： 血液系统（EBV-HLH、淋巴瘤、白血病、DIC、血小板减少、贫血） 消化系统（肝功能衰竭、消化道溃疡） 中枢神经系统 间质性肺炎 心血管（冠状动脉瘤、心肌炎、心瓣膜病） 皮肤（蚊虫叮咬过敏、皮肤牛痘样水疱 ） CAEBV的诊断标准(2) 血清抗体滴度异常升高 抗VCA-IgG≥1:640和抗EA-IgG≥1:160 抗VCA-IgA和/或抗EA-IgA常呈阳性 受累组织和外周血检测到EBV-DNA、RNA、有关抗原和克隆 PCR：外周血PBMC中EBV-DNA定量102.5copies/μg 原位杂交：检测出EBER-1阳性细胞 Southern杂交：受累组织或外周血中检测出EBV DNA 免疫荧光：检测到抗原（EBNA、LMP） 感染的B、T、NK细胞、单核/巨噬/组织细胞检测到EBNA、EBER、EBV-DNA EBV相关的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症EBV-associated hemophagocytic lymphohistocytosis EBV-HLH 是一种与EBV感染有关的淋巴增殖伴随吞噬血细胞现象的一类疾病 EBV感染所致CD8+T细胞的异常增殖及其激活巨噬细胞，导致炎症细胞因子大量释放产生高细胞因子血症（细胞因子风暴）是EBV-HLH的主要病例生理特征 临床表现发热、肝脾肿大、黄疸、全血细胞减少、DIC，骨髓和其他组织见嗜血细胞、LDH、铁蛋白、β微球蛋白 EBV-HLH常见于儿童和青少年 抗EBV病毒药物 无环核苷拟似剂 acyclovir（阿昔洛韦），ED50 0.3μΜ ganciclovir（更昔洛韦）， ED50 0.05μΜ valaciclovir（缬昔洛韦 ） 无环核苷酸 cidofovir，adefovir 焦磷酸盐 拟似剂 foscarnet（磷甲酸钠） 作用机制 作用病毒DNA多聚酶，抑制病毒复制 EBV感染的实验室诊断 外周血分类 淋巴细胞≥50% WBC 不典型淋巴细胞≥10% WBC（系激活的CD8+ CTL） 血清学检查 嗜异性凝集实验（heterophile test/spot test） VCA-IgM、IgG，EA-IgG，EBNA-IgG 病毒学标志 在PBMC、血清、全血或感染组织检测EBV-DNA、EBER、EBNA、LMP EBV感染疾病的血清学诊断 诊断 VCA IgM VCA IgG EA IgG EBNA IgG 既往无感染 － － － － IM (急性期) ＋ ＋ ＋ － IM（恢复期） ＋/－ ＋ ＋/－ ＋/－ 既往感染 － ＋ 低＋/－ ＋ 慢性活动性感染 ＋/－ 高＋ 高＋ ＋/－ 临床需要回答的问题 是否感染EBV? EBV感染的时相？ 是否EBV活动性感染？ 疾病是否与EBV感染相关？ EBV实验室检测方法 病毒培养 免疫学技术（免疫荧光法，免疫组化技术） 血清学方法（ELISA法，化学发光法） 基因诊断技术 嗜异凝集抗体试验：也称“Monospot”试验。在EBV还未确定为IM的病因之前，1932年引入临床实践诊断IM。 当时发现IM患者的血清或血浆可以凝集马或绵羊的红细胞。该抗体在病程第1～2周出现，持