课件：流式细胞术在出血与血栓性疾病中的应用.ppt

* * * 巨大血小板综合征糖蛋白分析 储存池病 (storage pool disease,SPD) BPC缺乏致密颗粒。 荧光法: 荧光染料盐酸阿地平标记BPC，显微镜观察。 FCM：直接测定致密颗粒 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 血小板自身抗体测定 包括： 针对人类组织相容性抗原的抗体：血小板表面相关抗体（PAIgG) 针对血小板膜糖蛋白抗体：GPIIb/IIIa 血小板特异性抗体与ITP ITP：血小板特异性抗体介导血小板破坏增加 机制： (1)自身抗体包备在血小板上，抗体Fab端与巨噬细胞Fc受体(FcR) 结合，血小板被吞噬破坏； (2)抗原-抗体复合物激活补体C1q及各成分，C3b附着于血小板表面， 与巨噬细胞C3b受体结合，血小板被吞噬； (3)巨核细胞与血小板有相同抗原性，血小板抗体通过Fab端与巨核细胞 结合，巨核细胞成熟障碍。 血小板表面免疫球蛋白（PAIg） 抗自身BPC抗体引起免疫性血小板破坏?? PAIg?(BPC表面结合的IgG) FCM：阳性细胞百分率与荧光强度增加， 双峰或峰型异常（破坏与生成均增加） 敏感性 ELISA (单个BPC上PAIg) MAIPA（单抗特异性捕获血小板抗体试验） PAICA（ BPC相关IgG特异性试验） 特异性 MAIPA PAICA 血小板抗体免疫流式检测法（PAICA)  FCM检测PAIg在诊断ITP中的评价 1、用于严重BPC减少者PAIgG检测； 2、特异性特异性结合抗体（MAIPA、PAICA） 特异性78-93%。敏感性49-66%； 可鉴别免疫与非免疫性BPC减少； 3、阴性不能排除；在诊断ITP中仅有参考价值。 目前国外（英国）已不作为ITP诊断标准。 特异性自身抗血小板膜糖蛋白抗体与ITP GPIIb/IIIa为一种重要的靶抗原，抗体封闭GPIIb/IIIa， 血小板数量减少；血小板粘附、聚集功能抑制。 ITP患者血浆存在特异性抗GPIIb/IIIa抗体( CD61/CD41 ）， 抗GPIb、抗GPIX抗体。 利用PE标记的CD61抗体： 非ITP血小板减少组CD61表达率显著高于ITP组（P0.05）， CD61敏感性86.2%，特异性90%。（薛磊、朱微波） 网织血小板（RP)检测 骨髓最早释放到外周血中含mRNA的新生BPC，用荧光染料噻唑橘红或 金胺橙标记BPC RNA。反映骨髓血小板生成状态的指标。 传统方法：1、手工计数；2、自动计数 FCM临床应用： 1、ITP 2、干细胞移植：预测骨髓造血恢复，在血小板恢复前增高； 移植后10-26天,RP由2.9±1.713.6±6.4,达峰值后3天。 血小板45.６Ｘ１０９/L, RP逐渐降低。 3、化疗后骨髓抑制与恢复； 4、肝移植 网织血小板检测临床意义 ITP：BPC破坏??外周血新生BPC??含mRNA的BPC荧光强度、 百分率增加，且与BPC呈负相关： BPC?，网织BPC?-负相关 治疗有效： BPC?，网织BPC?。 治疗无效： BPC?，网织BPC持续?。 Aa： BPC?，网织BPC?  FCM检测在ITP诊断中的意义 1、PAIgG 50-60%阳性，可鉴别免疫与非免疫性BPC减少， 敏感性49-66%；特异性78-93%； 2、特异性抗GPIIb/IIIa抗体( CD61/CD41） 敏感性86.2%，特异性 90%； 3、网织BPC?; BPC?-负相关； 4、BPC微粒（PMPS）：BPC破坏产生? BPC??? PMPS??。 FCM在血栓性疾病中的应用 1、血栓前（高凝）状态：BPC“活化”是参与血栓的前提，BPC活化指标： TXB2、GP（IIb/IIIa、Ib、V）、?-TG、PF4、 GMP-140； 2、冠心病：P-sel；CD41/CD61；sGC均? 不稳定心绞痛： P-sel，GPV ? AMI：P-sel，GPV ??； 溶栓再通：1-6h， P-sel，GPV ?