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2-2动物细胞工程2
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 * * * 复习提问: 1、比较动物细胞和植物细胞培养? 2、比较原代培养和传代培养? 3、比较细胞株和细胞系细胞的特点? 一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 1.概念: 2.结果: 3.原理: 4.诱导 方式 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 形成单核的杂交细胞 细胞膜的流动性 物理法:离心、振动、电激 化学法:聚乙二醇(PEG) 生物法:灭活的病毒 常用的灭活的病毒有: 思考讨论:为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活? 灭活的仙台病毒、 灭活的疱疹病毒 5.过程: 动物细胞A 动物细胞B 诱导,融合 1个完整的杂交细胞AB 注意:动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起,让它们随机融合后,再从中筛选杂交细胞 6.意义: 突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。 7. 应用: 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 1.什么是抗体? 2.抗体是由何种细胞产生的? 抗体是具有免疫作用的蛋白质。 受抗原刺激后,B淋巴细胞分化形成的浆细胞可以产生抗体。 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体的关系: 1、动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 2、每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 传统的抗体生产方法及缺陷是什么?怎样解决这个问题? 常规抗体的缺陷 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一浆细胞 特异性差、纯度低; 产量低、反应不够灵敏 不能增殖产生大量抗体 抗原 一、单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 2、怎样才能获得单克隆抗体? 提示1:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的? 提示2:有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢? 设计方案: 一个B淋巴细胞 ——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞 ——能无限增殖 杂交细胞 2、怎样才能获得单克隆抗体? 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体 单克隆抗体制备过程 体外培养 注射到小鼠腹腔 1. 原理: 杂交瘤细胞具有两个亲本的特性,即能迅速大量增殖,又能产生足够数量的单一抗体。 诱导融合 2. 过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞(B-瘤细胞) 克隆化培养 抗体检测 杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 三、单克隆抗体的应用 单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高 2.用于 运载药物:制成“生物导弹” 治疗疾病:主要用于癌症治疗 优点:准确、高效、简易、快速 优点:疗效高、毒副作用小 1.作为诊断试剂:准确识别各种抗原物 质,并与抗原特异性结合 制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法(同左) 灭活的病毒 物理(离心、振荡、电刺激) 化学(聚乙二醇) 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 * *
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