8-血清转氨酶测定(连续检测法).pptVIP

转移酶（transferases） 催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物的酶。 反应代表式为： AB+C A+BC B为被转移的基团，如氨基（-NH2）等 转氨酶（transaminase）： 又称氨基转移酶。大多数转氨酶是催化α-氨基酸的氨基转移到α-酮酸的酮基上，产生另一种α-酮酸和α-氨基酸。 血清丙氨酸氨基转移酶测定(alanine aminotransferase, ALT) 测定方法： -定时比色法（两点法） -酶联紫外连续监测法（动力学法或速率法） 酶联紫外连续监测法 原理： L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+ 在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力。 方法学评价： 血清中也含有酮酸及LDH，可以消耗NADH而使测定结果偏高。 对策：采用过量的NADH（终浓度0.14~0.2mmol/L），将血清同不含α-酮戊二酸的所有试剂一起预温，使其他副反应充分进行，再加入α-酮戊二酸以启动酶反应，监测光吸收的变化，可完全排除这种干扰。 定时比色法 国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。 国内较多采用赖氏法，其优点为： 标准曲线中两种酮酸的量客观地反映了酶作用的实际情况； 标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力的大小； 测定结果可以直接与分光光度法相比较。 计算 样品丙氨酸氨基转移酶活力（U/L）=△A/min*F 理论F=-4180 F值计算公式详见实验指导实验4，自动生化分析仪实际K值的测定。 参考范围：5～40U/L 临床意义 ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。 1、急性病毒性肝炎，可观察病情发展，作预后判断。 2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝，正常或轻度增高。 3、肝硬化、肝癌时，ALT轻度或中度增高，提示可能并发肝细胞坏死。 4、其它原因引起的肝脏损害、骨骼肌损伤、多发性肌炎等亦可引起ALT增高。 注意事项 -严重脂血症或黄疸血清可使测定管吸光度明显增加，检测此类标本时，应作血清对照管 -加入2，4-二硝基苯肼溶液后应充分混匀，使反应完全，否则影响重复性。 -呈色物质配制必须准确。 -应使用外观洁白、干燥的高纯度丙酮酸钠 -标本测定值超过150酶活力单位时，应用生理盐水稀释后再测。 丙酮酸和α-酮戊二酸在血清ALT的作用下生成丙酮酸和谷氨酸，在酶反应到达规定时间内，加入溶于酸的2，4-二硝基苯肼终止酶反应，并分别与产物丙酮酸和剩余底物α-酮戊二酸生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下均呈红棕色，二者吸收光谱在505nm处差异最大，丙酮酸苯腙的呈色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍，据此可算出丙酮酸的生成量，推算出ALT的酶活力。 实验九 血清丙氨酸氨基转移酶测定（连续监测法） 检验系生化教研室 包杰 2010.06.02 ALT LD 操作步骤 6 6 试剂（ ml ） 0.24 -- 蒸馏水（ ml ） -- 0.24 血清（ml） 空白管（B） 测定管（U） 混匀， 37℃恒温1min后测定初始吸光度，在340nm下，以蒸馏水调零，准确测定平均每分钟吸光度变化值△A/min。 附：赖氏法原理 *