分光光度法快速测定蔬菜水果中VC的含量.docx

分光光度法快速测定蔬菜水果中 VC 的含量于晓萍（扬州工业职业技术学院,江苏 扬州 225127）[ 摘 要] 通过吸收光谱曲线法确定 VC 的水溶液的最大吸收波长为 267 nm,进而通过工作曲线法快速测定蔬菜水果中 VC的含量，本方法与常规方法比较, 具有快速、准确、简便、试剂易得等优点。[ 关键词] 蔬菜；水果；VC；快速测定[ 中图分类号] O 657.32[ 文献标识码] B[ 文章编号] 1003-5095(2007）11-0076-02VC 广泛存在于新鲜水果中, 它具有保持肌肤润滑、防止衰老、抗坏血酸等作用,是人体必需的主要维 生素之一[1,2]。VC 在水果中主要以还原型(ASA) 存在。 VC 又名抗坏血酸,能溶于水、乙醇和甲醇,而不溶于 其他有机溶剂,具有酸味和还原性,有 4 种异构体, 即 L- 抗坏血酸、D- 抗坏血酸、L- 异抗坏血酸、D- 异 抗坏血酸。天然抗坏血酸主要以 L- 抗坏血酸为主,其 效力最高。抗坏血酸在合适的条件下,可氧化成脱氢 抗坏血酸, 脱氢后的 L- 脱氢抗坏血酸在生物体内可 还原为 L- 抗坏血酸,且这种变化是可逆的,故仍有生 物活性。脱氢抗坏血酸可进一步被氧化,生成二酮古 洛糖酸,而这一过程是不可逆的。在许多水果和蔬菜 中,VC 主要以还原型抗坏血酸存在。VC 的固体较稳 定,水溶液最容易受氧化,所以测定 VC 的准确性很 大程度上取决于分析技术。蔬菜中 VC 含量的测定一般采用 2, 6- 二氯靛酚 滴定法、碘量法、2, 4- 二硝基苯肼法和萤光分光光 度法等[3]，这些方法都有所用试剂不稳、操作程序复 杂、费时等缺点，为此，笔者首先通过吸收光谱曲线法 确定 VC 的水溶液的最大吸收波长为 267 nm,进而通 过工作曲线法快速测定蔬菜水果中 VC 的含量，本方 法与常规方法比较, 具有准确、快速、稳定、试剂易得 等优点。吸量管。VC 标准溶液 （25.00μg/mL）：称取 0.250 0 g VC，溶于蒸馏水中，定量转移至 100 mL 容量瓶中，稀 释至标线，摇匀。用吸量管吸取 10.00 mL 定量转移入1 000 mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻线，摇匀，因 为 VC 水溶液最容易受氧化，要求现配现用。1. 2实验方法1. 2. 1标准系列溶液的配制分别吸取上述溶液 0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL 于 6 个洁净且干燥的 50 mL 容量瓶中，用 蒸馏水稀释至标线，摇匀。1. 2. 2吸光度的测定1. 2. 2. 1绘制吸收光谱曲线以蒸馏水为参比，取上述配置的含 VC 标准溶液6.00 mL 的溶液，在 220－320 nm 范围绘制 VC 的吸 收光谱曲线，并确定入射光波长 λmax。1. 2. 2. 2绘制工作曲线以蒸馏水为参比，取上述配置的系列标准溶液， 于 λmax 波长处测吸收度，做标准曲线。1. 2. 3样品分析样品用榨汁机获得蔬菜汁或加适量水匀浆，于1 000 r/min 下，离心 10 min，取上层清液，视 VC 含 量及样液颜色确定稀释倍数。2结果与讨论1试验部分1. 1仪器与试剂756 型紫外－可见分光光度计；石英吸收池一 对；榨汁机；50 mL 容量瓶；1 000 mL 容量瓶；10 mL2. 1吸收曲线按 1.2.2.1 实验方法所得数据绘制吸收光谱曲线(图 1)，由图 1 可见, 最大吸收波长在 267 nm 处,可作定量依据。[ 收稿日期] 2007-08-03[ 作者简介] 于晓萍（1970-），女，副教授，研究方向为仪器分 析。第 11 期于晓萍：分光光度法快速测定蔬菜水果中 VC 的含量·77·由图 2 查得稀释一定倍数后的蔬菜水果中的 VC的含量，并按下式计算原蔬菜水果中的 VC 的含量。式中，ρ 为某蔬菜或水果中 VC 的含量，mx 为从标准曲线图上查得，稀释一定倍数后的蔬菜水果中的 VC 的含量相当于 50 mL 容量瓶中所含 VC 的质量。将 实验所测定的西红柿、黄瓜、苹果、西瓜的测定计算结 果列于表 1 中。表 1 VC 含量的计算结果λ/nm图 1 吸收光谱曲线2. 2酸度对吸收波长的影响实验结果表明, 不同 pH 值下, VC 的最大吸收 波长会有所变化。 当 pH＜ 4 时, 最大吸收波长紫 移, 这可能是由于 VC 此时以离子化形式存在而造成 的。当 pH ＞12 时, 最大吸收波长红移, 很明显这是 由于 VC 在碱性环境中不稳定分解而引起的。pH 值在5－10 时的最大吸收波长不变，为 267 nm，但 pH=6 时 的吸收值最大, 故选择最佳 pH 值为 6。2. 3标准曲线蔬菜或水果名称西红柿榨汁中 VC 含量 /μg·mL-1381黄瓜180苹果西瓜2