肉毒梭菌的课程教学.pptx

肉毒梭菌主讲：张静静图片：徐双梅 冯桂梅资料收集：杨雪 崔学怡 姚淑慧 幻灯片制作：冯路笛 陈希 卢雨婷 毛海波形态特征 肉毒梭菌一、肉毒梭菌的生物学特性1、形态与染色 肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。病毒因子 2、培养特性最严格的厌氧菌生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2。产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。 在固体培养基表面上，形成类圆形，边缘不整齐，约3毫米左右的菌落。菌落半透明，表面一般比较光滑也有的呈颗粒状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状，常常扩散成菌苔。肉毒梭状芽孢杆菌菌落 2、培养特性在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大量气体，A、B、F三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味；而C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有。肉毒梭状芽孢杆菌菌落 3、抵抗力本菌芽胞抵抗力强，在湿热100℃可生存5小时;干热180℃2小时、高压蒸汽121℃30分钟才能将本菌芽胞杀死。肉毒毒素不耐热，100℃20分钟即可破坏。二、肉毒梭菌的致病性 肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据毒素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、G七个型别。与毒素型别相对应，肉毒梭菌也分为同样的七个型别。其中A、B、E、F四型毒素对人有不同程度的致病性。 A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。致病物质 主要依靠神经外毒素。其作用机制：肉毒杆菌毒素作用于胆碱能运动神经末梢，以某种方式拮抗钙离子的作用，干扰乙酰胆碱从运动神经末梢的释放，使肌纤维不能收缩。肉毒杆菌毒素不阻断神经兴奋的传播，神经和肌肉都没有兴奋性和传导性的损害。这种作用也称为化学去神经作用。 致病机理 肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹导致死亡。?? 肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒素1克能杀死400万吨小白鼠，一个人的致死量大概1微克左右。 肉毒中毒一年四季均可发生。美国以罐头发生中毒较多，日本以水产品较多；我国以发酵食品（如：臭豆腐、豆瓣酱、豆豉等）发生中毒较多。 所致疾病成人肉毒中毒该病是单纯性毒素中毒，而非细菌感染引起。多见于食入肉毒毒素食品后，数小时或数十小时可出现以神经末梢麻痹为主的症状，患者出现斜视、复视、眼睑下垂，严重的出现吞咽、咀嚼困难、口齿不清，进而因膈肌麻痹而死亡。患者神志清醒，不发热，很少有胃肠道症状。婴儿肉毒中毒 多见于2周~8个月的婴儿。由于婴儿肠道的特殊环境及缺乏拮抗肉毒梭菌的正常菌群，又食入被梭菌污染的食品，该菌在肠道内生长繁殖并产生毒素，毒素被吸收而致命。最早出现的症状是便秘，吸乳、啼哭无力，其他症状与成人肉毒中毒类似。三 微生物学检验1、取.粪便检查在显微镜检查可见革兰阳性芽胞杆菌。2. 细菌培养：将可疑食物、呕吐物或排泄物加热煮沸20分钟后，接种于血琼脂培养基作厌氧培养，可分离出肉毒梭菌。3. 毒素试验（1）动物试验 将检查标本浸出液饲喂动物，或作豚鼠、小白鼠腹腔内注射。可引起动物四肢/subview/559937/559937.htm瘫痪而迅速死亡。婴儿型者则可用婴儿粪便浸出液作动物试验。（2）中和试验 将各型抗毒素血清0.5ml注射小白鼠腹腔内，随后接种标本0.5ml同时设对照组，从而判断毒素和定型。（3）禽眼睑接种试验 将含有毒素的浸出液0.1～0.3ml，注入家禽眼内角下方眼睑皮下，出现眼睑闭合、或出现麻痹性/subview/559937/559937.htm瘫痪和呼吸困难，经数十分钟至数小时死亡，可作为快速诊断。4. 毒素检测应用抗肉毒毒素抗体进