构象记忆的辣根过氧化物酶的微水相共价固定化.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, December 25; 25(12): 1969-1975 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 “” 蔡奕璇, 陈俊华, 姚冬生, 刘大岭 , 510632 : 本研究利用酶在微水溶剂中的“ 构象记忆” 特性, 以壳聚糖微球为载体, 以辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP) 为研究对象, 将 HRP 于活性构象下冻干“ 固定”后, 在二氧六环:水=99:1( V/ V)微水介质中与载体进行共 价交联, 同时与传统水介质中共价交联固定化的HRP 进行比较。结果发现, 两种介质中固定化HRP 的最适温度都提高 到 60°C, 最适 pH 均为 6.5, 而微水相中固定的酶活力损失较低, 酶活比传统水相中固定的酶高 6 倍以上; 70°C 保温 30 min 后, 微水相中固定的酶保留75.42% 的活力, 而水相中固定的HRP 仅存 15.4%的活力; 微水相中固定的HRP 具有 更好的操作稳定性和热稳定性, 60°C 下连续操作5 次之后, 微水相固定的HRP 保留77.69% 的酶活, 而水相固定的HRP 仅存 16.67% 的酶活; 微水相中固定的 HRP 在苯酚的去除中表现得更具优势; 微水相中共价交联制备的 CS-HRP-SWCNTs/Au 酶修饰电极对H2O2 的响应信号比水相中共价固定的酶电极强2.5 倍, 灵敏度更高。本研究表明利 用酶的“构象记忆”在微水介质中进行共价交联是固定化酶的一种可行方法, 所制备的固定化酶具有更优良的性质。 : 构象记忆, 微水介质, 共价固定, 辣根过氧化物酶 Investigation of micro-aqueous covalent immobilization of horseradish peroxidase by “conformation memory” Yixuan Cai, Junhua Chen, Dongsheng Yao, and Daling Liu Institute of Microbial Biotechnology , College of Life Science and Technology, Jinan University , Guangzhou 510632, China Abstract: We has studied the feasibility of preventing protein from denature during covalent immobilization by “con