第七章 体外抗原抗体反应概述.pptVIP

4、决定抗原抗体解离的因素 （1）抗体与相应抗原的亲合力。 亲合力低的抗体与抗原形成的复合物较易解离。 （2）环境因素对复合物的影响。 PH过高或过低、增加离子强度均可破坏 静电引力，使抗原抗体结合力下降，促使其 解离。 注意：解离后的抗原或抗体仍然保持其原有生物活性 四、阶段性 特异性结合 两个阶段 可见反应阶段 数秒～数分钟， 肉眼不可见 数分～数小时 肉眼可见 第三节 抗原抗体反应影响因素 一、反应物自身因素 1.抗原：理化特性、Ag决定簇数量和种类。 例如，可溶性抗原与相应抗体反应出现沉淀，而颗粒性抗原与相应抗体反应则出现凝集;单价抗原与抗体结合不出现可见反应;粗糙型细菌在生理盐水中易出现自凝；红细胞与IgG类抗体结合不出现直接凝集等。 抗体是血清学反应中的关键因素，对反应的影响表现在以下三个方面: (1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物;马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物. 2.抗体 (2)特异性与亲和力: 特异性和亲和力是影响血清学反应的两个关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。 免疫动物早期获得的抗血清特异性较好，但亲和力低;后期获得的抗血清一般亲和力较高，但长期免疫易使免疫血清中抗体的类型和反应性变得更为复杂。因此，用于诊断的试剂必须尽量选用特异性高、亲和力强的抗体，才能保证和提高试验结果的可靠性。 （3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH8 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 二、环境因素 （一）电解质 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。 通常在血清学试验中，以8.5g/LNaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。 补体参与的溶细胞反应，除需要等渗的NaCl溶液外，还需适虽的Mg2+和Ca2+离子参与。 （二）酸碱度 Ag、Ab多为蛋白质，具两性电离特性，有其故有的PI , pH过高或过低均可影响Ag、Ab反应。 一般：pH6～8为宜，补体参与时pH7.2～7.4。 注意：自凝现象------即pH达到或接近颗粒性抗原的PI时，引起的抗原非特异性自身凝集现象。 （三）温度—影响反应速度 一般：15～40 ℃为宜， 最适温度：37℃, 过高（56）: Ag-Ab解离， Ag、Ab变性， 补体失活。 冷凝集实验：4 ℃凝集，20解离。 （四）其他 振荡、搅拌等可加速反应 第四节 抗原抗体反应类型 1.沉淀反应 2.凝集反应 3.补体参与的反应 4.中和反应 5.标记免疫反应 表 抗原抗体反应的基本类 型 表 反应类型 实验技术 检测方法 敏感度 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀、检测浊度 +，++++ 琼脂凝胶扩散 观察扫描沉淀线或环 + 凝胶电泳技术 或峰或弧 ++ 补体参与反应 补体溶血试验 以裸眼或光电比色仪 ++ 补体结合试验 观察测定溶血现象 +++ 免疫标记技术 荧光免疫技术 检测荧光现象 ++++ 放射免疫技术 检测放射性 ++++ 酶标免疫技术 检测酶底物显色 ++++ 发光免疫技术 测定发光强度 ++++ 生物素-亲合素技术 结合其它标记技术 ++++ 金标免疫技术 检测金颗粒沉淀 ++++ 凝集反应 直接凝集试验