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. . 关于人-鼠嵌合抗体制备的可行性 概述 人-鼠嵌合抗体，即抗体的可变区来自鼠单克隆抗体，而恒定区则来自人的抗体。它是通过从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞表达产生。嵌合抗体既保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力，又大大减少了鼠源性在人体内的免疫原性，其半衰期明显延长，且在介导CDC及ADCC方面亦明显增强。 市场分析 附表是中国SFDA批准上市和进入临床的治疗型单抗药物 抗体名称 厂家 靶抗原 抗体类型 适应症 研发阶段 Muromonab-CD3 强生 CD-3 鼠源 抗移植排斥 批准上市 Rituximab 罗氏 CD-20 嵌合 B 细胞非霍奇金淋巴瘤 批准上市 Trastuzumab 罗氏 HER-2 人源化 乳腺癌 批准上市 Basiliximab 诺华 CD-25 嵌合 抗移植排斥 批准上市 Trastuzumab 基因泰克 HER-2 人源化 乳腺癌 批准上市 OKT3 武汉生物制品研究所 CD-3 鼠源 抗移植排斥 批准上市 抗人IL-8单克隆抗体乳膏 东莞宏远逸士生物公司 IL-8 鼠源 银屑病 批准上市 重组人源化抗人表皮因子受体单克隆抗体注射液 百泰生物药业公司 人表皮因子受体 人源化 上皮源性肿瘤 批准上市 碘［131I］美妥昔单抗注射 成都华神集团，第四军医大学 鼠源 肝癌 批准上市 碘［131I］人鼠嵌合型肿瘤细胞核单克隆抗体注射液 上海美恩生物技术公司 嵌合 抗肿瘤 批准上市 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体－抗体融合蛋白 上海中信国健药业公司 肿瘤坏死因子 人源化 银屑病和强直性脊柱炎 批准上市 鼠抗人T淋巴细胞CD3表面抗原单克隆抗体 济南天康生物制品公司 CD-3 鼠源 抗移植排斥 临床研究 注射用抗肾病综合症出血热病毒单克隆抗体（I型） 武汉生物制品所，第四军医大学 鼠源 出血热 临床Ⅲ期 抗人肝癌单抗Hepama?1 中科院细胞所 鼠源 肝癌 临床研究 抗乙型脑炎单抗 北京生物制品所，第四军医大学 鼠源 乙型脑炎 临床研究 注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白 上海美恩生物公司 嵌合 肿瘤 临床研究 目前国内上市的单抗药物有11个，其中5个是国外进口产品，我国上市的自行开发的治疗性单抗药物的有6个，处于临床研究阶段的有5个(表6)。其中，武汉生物制品研究所抗肾移植单抗OKT3（注射用鼠源性抗人T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体），也是最早批准上市的国内自行研制的抗体，具有免疫抑制作用，可逆转对移植器官的排斥反应；由北京百泰生物药业有限公司与古巴合作开发的I类癌症治疗新药“重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体”（商品名：泰欣生）于2005年4月11日获得国家I类新药证书。这是我国批准的第一个人源化单克隆抗体药物，它的问世标志着我国在癌症靶向治疗和人源化抗体药物领域取得重大突破，该药主要用于治疗头颈部、食管、肺部、乳腺、结直肠等部位的上皮源性肿瘤；由第四军医大学、成都华神集团股份有限公司联合研制的碘［131Ｉ］美妥昔单抗注射液（商品名：利卡汀），于2005年4月20日获得国家I类新药证书。这是全球第一个用于治疗原发性肝癌的药物，也是我国第一个具有自主知识产权的抗体类药物。 应用 嵌合抗体目前主要用于药物治疗方面，与鼠抗相比，嵌合抗体既保留了鼠源可变的高亲和性，又具有人Fc段的多种免疫杀伤功能，从而大大降低了人抗鼠抗体反应的发生几率，改善了临床治疗效果，与其它小分子基因工程抗体相比，嵌合抗体作为完成的抗体分子，在体内半寿期更长，并具有人Fc段的多种免疫杀伤功能。? 技术路线 从杂交瘤细胞中提取总RNA 从杂交瘤细胞中提取总RNA 反转录合成cDNA 扩增轻链、重链的V区基因 插入含信号肽及人Ig重链、轻链C区基因的真核表达载体 转染Sp2/0细胞 克隆、测序分析 制备腹水生产抗体 检测抗体特异性与人源性 酶切鉴定、测序分析 材料与仪器 材料 大肠杆菌DH5α，大肠杆菌感受态细胞，T-A克隆载体T-Easy Vector，含信号肽及重链、轻链恒定区基因的质粒pAc-κ-CH3，分泌单抗的杂交瘤细胞，真核表达载体pcDNA3.1，小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0。 主要试剂 氨苄西林钠，限制性内切酶，T4 DNA连接酶，Taq DNA酶，Trizol RNA提取试剂盒，反转录PCR试剂盒，琼脂糖，嗅化乙锭(EB)，dNTPs，DNA Marker，DNA凝胶回收试剂盒，质粒抽提试剂盒，胎牛血清，无血清培养液，二甲亚砜(DMSO)，转染试剂盒LipofectamineTM 2000，MTX，抗原，羊抗人IgG Fc片段-HRP酶标抗体。 主要仪器 低温高速台式离心机，恒温摇床，恒温水浴箱，水平式电泳仪，PCR扩增仪，紫外分光光度计，紫外透射仪