分子生物学实验 CLEC4M.pptVIP

基因多态性 　　　多态性是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或多种不连续的变异型或基因型(genotype)或等位基因(allele)，亦称遗传多态性(genetic polymorphism)或基因多态性。 　　　　　　　　　DNA片段长度多态性 　　　基因多态性　DNA重复序列多态性 　　　　　　　　　单核苷酸多态性 　DNA片段长度多态性(FLP)： 　　　即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性内切酶位点的变化，而导致DNA片段长度的变化，又称限制性片段长度多态性。 　DNA重复序列的多态性(RSP) ： 　　　主要表现于重复序列拷贝数的变异 ，如小卫星DNA和微卫星DNA。 　单核苷酸多态性(SNP) ： 　　　即散在的单个碱基的不同，基因组中单核苷酸的缺失,插入与重复序列不属於SNP，但更多的是单个碱基的置换。 　　 CLEC 4M基因多态性分析 CLEC 是C type lectin（C型凝集素）家族基因 CLEC4M基因是19号染色体上C型凝集素家族中的一员，它被证明是多种传染性疾病病毒的受体，如HIV-1, SARS-Cov, HCV等。该基因的第4外显子的VNTR (Variable Number of Tandem Repeats，VNTR )在全球人类群体中存在3-9次重复的多态现象，并被认为这种不同长度的多态可能和宿主对病毒的易感性有关。 CLEC4M 与SARS 体内存在一种SARS冠状病毒的受体L-SIGN，由CLEC4M基因所编码。该基因第4外显子存在3-9个69bp的重复片段，人群中超过50%的人以7个重复为主，常见的基因型为7/7，5/5，7/5 等不同的纯合或杂合状态，这个重复区编码位于胞外受体的颈部。研究表明，纯合型如7/7或 5/5的个体较杂合型7/5的个体较少感染SARS病毒。 CLEC 4M基因序列 实验原理 原理：用裂解液和蛋白酶K裂解口腔黏膜细胞，释放DNA，用浓盐法沉淀蛋白质，离心去除蛋白质，再用异丙醇沉淀DNA。 裂解液配方： 10mM Tris-HCl，10mM KCl, 10mM MgCl2, 2mM EDTA, 0.4M NaCl, 1%SDS. 2×PCR mix ddH2O 引物1，引物2 2×PCR mix 10μl 引物1，引物2 各0.4μl ddH2O 6.2μl DNA样品 3μl PCR反应体系， 总共20 μl 在PCR管盖上标记号码，便于辨认 放入PCR仪，并设置程序 变性 95℃ 5min 95℃ 20s 30循环 59℃ 30s 72℃ 45s 延伸 72℃ 5min PCR过程大概100分钟 PCR仪器界面和参数 紫外透射分析 点 样 将PCR扩增产物加入琼脂糖凝胶孔内，点样量10μl 100bp DNA marker，最亮的为500bp 500bp 杂合子，根据位置判断为589和727bp。 杂带，分子量小，或是引物二聚体 结果分析 同学们，你们的基因是纯合还是杂合呢？ 请继续思考… 这种技术属于哪一种分子标记技术？ 这种技术还可以用于哪些方面？亲子鉴定？