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酵母双杂交技术
酵母双杂交技术
酵母双杂交系统( two-hybrid
system) 也叫相互作用陷阱
( interaction trap),是1989年由
Song和Field基于酵母的细胞内检
测蛋白间相互作用的遗传系统建立
的。
酵母双杂交技术是一种有效的真
核活细胞内研究方法,在蛋白质相
互作用的研究方面得到了广泛的应
用并取得了许多有价值的重要发现。
在此基础上又发展了反向双杂交,
Stanley Field 三杂交及核外双杂交等多项技术。
酵母双杂交技术的提出
2.酵母双杂交原理介绍
酵母中,半乳糖代谢所需的基因被两个调节蛋白
所控制:GAL4,GAL80
当存在半乳糖时,GAL4蛋白与UAS上游的基因中
的GAL4效应元件结合,激活转录。
不存在半乳糖时,GAL80结合GAL4阻碍转录激活。
2.酵母双杂交原理介绍
完整的酵母转录因子GAl4分为结构上可以分开的、
功能上又相互独立的2个结构域。
一个是位于N端1-174位氨基酸残基区段的DNA结
合域(DNA binding domain, DNA-BD)。
另一个是位于C端768~881位氨基酸残基区段的
转录激活域(Activation domain ,AD )。
酵母双杂交技术原理
很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具
有两个可分割开的结构域,即DNA特异结合域
(DNA-binding domain,BD)与转录激活域
(Transcriptional activation domain ,AD )。
这两个结构域各具功能,互不影响。但一个完
整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含
有这两个结构域,否则无法完成激活功能。
酵母双杂交系统组成
酵母双杂交系统由三个部分组成:
(1)与BD融合的蛋白表达载体,被表达的蛋白称诱饵
蛋白(bait);
(2)与AD融合的蛋白表达载体,被其表达的蛋白称靶
蛋白(prey);
(3)带有一个或多个报告基因的宿主菌株。常用的报
告基因有HIS3,URA3,LacZ和绿色荧光蛋白等
2.酵母双杂交原理介绍
一个酵母双杂交系统包括3个部分:
带有1个或多个报告基因的宿主菌株;
与GAL4-BD 融合表达蛋白,被表达的蛋白称为旅
馆诱饵蛋白(bait);
GAL4-AD 融合表达载体,被表达的蛋自称为靶蛋
白(prey)。
2.酵母双杂交原理介绍
将可能存在相互作用的2种蛋白质,即已知蛋白X
和待研究蛋白Y ,分别作为诱饵(ba
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