课件：二蛋白质结构与功能沈.ppt

几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 * 层 析 层析(chromatography)分离蛋白质的原理 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。 蛋白质分离常用的层析方法 * 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 * 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。 目 录 透析及超滤法 * 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 * 超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。 二、蛋白质的高分子性质 超速离心 * 超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。 *蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。 因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 三、蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。 * 蛋白质胶体稳定的因素 1、颗粒表面电荷 2、水化膜 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 * 蛋白质沉淀 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链就会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 *盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 丙酮沉淀、 *使用丙酮沉淀时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 * 免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 四、蛋白质的紫外吸收光谱及呈色反应 由于蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 紫外吸收光谱 蛋白质的呈色反应 2、 茚三酮反应(ninhydrin reaction) 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可茚三酮反应生成蓝 紫色化合物。 3、双缩脲反应(biuret reaction) 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共 热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度和多肽的定量测定。 1、Folin酚试剂反应： 蛋白质中含有酚羟基的氨基酸，在碱性条件下，能与 酚试剂反应生成蓝色化合物。 1、名词解释：肽平面、基序、结构域、变构效应、 蛋白质的等电点（PI）、蛋白质的变性 2、蛋白质的基本组成单位是什么？其结构特征是什么？ 3、根据氨基酸侧链基团结构，试述氨基酸的分类？ 可电离的极性氨基酸有哪些？ 4、蛋白质的二级结构有哪些？试述α-螺旋的特点。 5、举例说明蛋白质一级结构是空间结构的基础 。 6、列表说明蛋白质各级结构的定义和维系力 。 7、什么是分子病？ 蛋白质构象病？ 复习思考题： 1.蛋白质的元素组成中，氮含量有什么特点？该特点有什么意义？ 2.蛋白质的基本组成单位是什么？写出其结构通式。 3.所有氨基酸的?-碳原子都是不对称碳原子吗？ 4.“自然界存在300多种氨基酸和百亿种蛋白质，因此，参加蛋白 质合成的氨 基酸至少有300种。”这句话对吗？为什么？ 5.什么叫“编码氨基酸”？ 6.非电离的极性侧链氨基酸真的不能电离吗？ 7.多肽链中氨基酸残基之间的连接是通过什么化学键？ 8.12个氨基酸残基组成的多肽链称为几肽？ 9.什么是