课件：二蛋白质化学forgraduaescandidaes.ppt

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * * * * * * * * * * * * 四級構造 的妙用，可以 血紅蛋白 (Hb) 與 肌紅蛋白 (Mb) 的例子說明。 Hb 是四元體，有所謂的四級構造；Mb 為單元體，只有三級構造。Hb 在血中循環，由肺泡中取得氧分子，運送到肌肉中，下載給 Mb。 因此 Hb 必須得知，何時該吸收氧分子，何時該放出；也就是說 Hb 必須有感應氧分子濃度的能力，同時還得做出吸收或放出的動作。這些能力都源自其四級構造的組成。 在靜脈中 Hb 都不載有氧分子，這時候它的四個次體分子都處於一種休息狀態，結合區不容易張開讓 heme 接受氧分子。 當 Hb 循環到肺部時，環境的氧分子濃度提高了，四個次體的任何一個分子接上一個氧分子後，馬上會牽動其它次體，使得其它次體的分子構造舒張，變得很容易接受氧分子。因此在肺部的 Hb 都很容易地滿載氧分子，經動脈輸送至肌肉。若當時肌肉相當勞累，需要大量氧分子的補充，其酸鹼度會降得比較低，Hb 就更容易釋出氧分子，而 Mb 則一昧地吸收 Hb 所下的氧分子，並無調節作用。放下氧分子的 Hb 就回復休息狀態，循著靜脈流回肺部。 蛋白質的構形事實上都不是固定不動，其分子會有某些程度的運動，上述的 Hb 分子也是如此。當其處於休息狀態時，是分子較為緊密的一種構形，稱之為 tense (T) 型；反之，若其構造較為疏鬆，則基質或其結合對象比較容易進入，稱之為 relaxed (R) 型。 T 與 R 型的變化，在酵素分子的活性調節也很重要，在酵素部分會繼續提到。 P67 * 等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 原因？ 盐溶—盐析 加入少量盐离子后破坏了这种吸引力，使分子分散 盐溶 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出 原因？ 蛋白质脱去水化层而聚集沉淀 盐析（（NH4）2SO4） 蛋白质沉淀，常选用硫酸铵 优点： 1.??溶解度大，对温度不敏感 水温25℃，饱和溶解度为4.1M 水温0℃，饱和溶解度为3.9M 2.?分级效果好，去杂75%以上 3.?有稳定蛋白质结构的作用 经2-3M硫铵盐析的Pr可低温保存1年以上 缺点：继续纯化时，需脱盐。 盐分级沉淀 重金属盐沉淀 与带负电荷蛋白质结成不溶性盐 生物碱试剂和某些酸类沉淀 与带正电荷蛋白质生成不溶性盐 加热变性沉淀 天然结构解体，疏水基外露， 破坏水化层及带电状态 （四）紫外吸收特征 ——用于蛋白含量的测定 （五）变性/复性 引起生物功能丢失的三维结构改变（变性） 肽链未必完全伸展或构象无序化 实质：次级键（非共价键）被破坏 变性蛋白质特点 A.生物活性丧失 B.侧链基团暴露:易与化学试剂反应 C.理化性质改变: 疏水基外露溶解度 分子相互凝集，形成沉淀 D.生化性质改变：结构伸展易被酶解 何谓Pr变性与复性？变性Pr发生哪些性质上的变化？ 变性：Pr的次级键破坏,天然结构解体,引起生物活性丧失,溶解度降低以及其它理化常数改变，但一级结构没有变化。 A.生物活性丧失 B. 侧链基团暴露:更易与化学试剂反应 C. 理化性质的改变:疏水基外露,溶解度降低 D.生物化学性质的改变，分子结构伸展，易被酶解 复性：当变性因素除去后，变性Pr重新回复到天然结构的现象（ 吴宪） 蛋白质变性过程中与下列哪项无关（ ）。 A.理化因素致使氢键破坏 B.蛋白质空间结构破坏 C.疏水作用破坏 D.蛋白质一级结构破坏，分子量变小 加入下列试剂不会导致蛋白质变性的是（ ） A.尿素（脲） B.盐酸胍 C. SDS D.硫酸铵 变性蛋白质的主要特点是： A．粘度下降　　 B．溶解度增加　　　　 C．不易被蛋白酶水解 D．生物学活性丧失　　　 蛋白质变性是由于 ( )。 蛋白质一级结构的改变 B.亚基解聚 C. 辅基脱落 D. 发生水解 E. 空间构象的破环 五、蛋白质的分离与纯化 （一）抽提原理及方法 （二）纯化方法：电泳、离心、层析 （三）定量方法 （一）蛋白质分离纯化的一般原则 总目标：增加制品纯度或比活 1. 前处理：因来源而异（释放活性物质） 2. 粗分级：盐析/等电点/有机溶剂沉淀 3. 细分级：凝胶过滤、离子交换/吸附/亲和层析 4.结晶是最后步骤 （二）蛋白质的分离纯化方法 1. 根据分子大小差异 透析和超过滤、凝胶过滤 2.利用溶解度差别 等电点沉淀、盐析、有机溶剂分级分离 3.根据电荷不同