标准病理组织制片和染色技术.doc

病理组织制片和染色技术 张进华 一、前 言 病理组织制片和染色技术是病理学的 重要组成部分，病理的教学、科研、临床 活检、尸解检验、诊断等都离不开制片染 色技术工作。因此，组织的制片和染色技 术是研究病理学的重要的方法和手段之一。 近年来病理技术不断发展，如特殊染色、 组织化学、免疫组织化学（免疫荧光组织化 学、免疫酶组织化学）细胞培养、原位分子 杂交、放射自显影、原位PCR技术等在广泛 的应用和提高，大大促进了病理学科的发展， 把病理学推进了一个新的领域，但这些新技 术也都建立在病理组织制片或染色基础上， 所以要认识制片和染色技术的重要性，不但 要学习新技术，更要掌握这一传统的病理技 术，共同推向病理学科的发展。 组织制片技术的应用，从1665年 由Hook发现细胞开始已300多年历史， 最早应用冰冻切片随后又发展了石蜡 切片，后来又利用明胶、火棉胶、碳 蜡（聚乙二醇）、塑料、包埋组织而 制作切片。 从而观察不同的组织、细胞 的形态结构，以及细胞内某些化 学成份含量变化。 各种组织制片成切片标 本，须要经过一个比较繁多 的过程，现将制作切片的主 要程序和制片的种类，介绍： 石蜡制片程序 组织取材、固定、脱水、透明、 浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱 蜡、各级酒精、水洗、常规染色、脱 水、透明、树胶封固。 冰冻制片程序 组织取材、冰冻切片、干燥 粘片、固定、染色、脱水、透明、 树胶封片。 非切片 （了解内容） 1 整体封藏法－低等动物自身薄片如：鱼 鳞片、蛙胚。 2 涂片法－如：血液、精液、痰、胸腹 水等 3、磨片法－主要用有钙盐坚硬材料，牙 齿、介壳、坚骨－手工磨 4 分离法a、压片法－动终板的制备b、撕 碎法c压碎法 二、取材（实验病理、临床病理、尸解诊断） 1、实验病理取材 (1)动物的杀死：动物杀死方法很 多，根据动物大小、种别、观 察目的而定。 A：断头法：青蛙、小鼠等较小的动物 B：空气栓塞法：兔猫（20－40ml） 狗100ml C：麻醉法：乙醚、氯仿、4%巴比妥 作V注射1ml/1kg，20%氨基甲酸 乙酯（尿烷）作腹腔注射5ml /1kg D：击头法：大鼠 E：放血法：眼球放血（小鼠） 股动脉放血，大动物： 牛、猪 原则：要尽避免使动物长时间 陷入痛苦和濒于死亡状态，以免疫 组织成份，结构发生变化，引起病 理假象。 (1) 取材时所用的刀要锐利，动作仔 不可来回切割，勿使组织受挤压。 细， (2) 注意组织，器官的切面： 肾脏――纵切 脑――（表面和脑沟成直角）垂 直切 肝脾――横纵均可 （3） 保持组织清洁：血液，污物， 粘液，食物用生理盐水洗净。 （4） 保持标本新鲜：动物死后立 即固定。 (5) 切取组织大小： 0.5×0.5×0.2cm 1 ×1 ×0.3cm 1.5×1.5×0.5cm 2 . 临床活检取材： 注意事项： （1） 申请单位姓名与标本一致，防止混乱差错。 （2） 检查标本是否符合要求―干涸坏变，固定 液 多少。 （3） 取材时描写：大小，形态，色泽，硬度等。 （4） 芝麻或针帽大小组织――染伊红？：镜纸 包好 （5） 常见肿瘤取材方法：略。 3. 尸体解剖组织（脏器）取材：略。 三．固定（ fixalion） 固定：新鲜组织浸泡在适宜的化 学试剂内借助于化学试剂的作用，使 组织或细胞内蛋白质凝聚，沉淀，成 为溶性并保持组织细胞原有的形态结 构：称为固定。所使用的化学试剂配 成的溶液，称为固定液。 1. 固定的目的 (1) 迅速防止组织细胞死后自溶和腐败 （组织失氧→释放溶酶体酶→溶解组织） (2) 固定或沉淀细胞内或组织液中蛋白，脂 肪，糖原，无机盐和色素，使其不被溶 解和消失。 (3) 使组织硬化，有一定弹性→抵抗以后的 脱水，透明，使组织发生扭曲，变形。 (4) 某些传染性标本，能防止疫病的扩散。 （如结核等） (5) 保存细胞内固有的物质：如包含体，线 粒体，溶酶体等。 (6) 可增强染色作用 (7) 有利于各种细胞折光率。 (8 ) 固定后能产生良好的反差。 2、固定的注意事项： (1) 必须及时固定：夏天4h冬天24h就自溶。 (2) 固定液的用量：标本体积10－15倍。 (3) 固定时间：根据组织不同的种类、性质 大小、固定液的种类而定。 (4) 固定用的容器要足够大，一般标本缸， 广口瓶 4、固定液的分类、配制和特性 （1）分类 A：凝固性－酒类、丙酮、氯化汞等 非凝固性－甲醛、戌二醛等 B：醛类－甲醛、戌二醛 氧化剂类－重铬酸钾、高猛酸钾 蛋白质变性－酒精、苦味酸 C：单纯固定液-10%甲醛 95%乙醇 混合固定液-Boon’s Conroy’s (2)常用固定液的配制及性质： A：10%甲醛-应用广泛 (注：36-40%作为