形态学实验技术培训课件.ppt

形态学实验技术 王世忠 * 1.非切片制作方法 组织分离标本 组织活体标本 细胞涂片标本 组织磨片标本 整体封存标本 组织铺片标本 形态学制片种类 2. 组织切片制作方法 石蜡切片 火棉胶切片 冰冻切片 树脂切片 碳蜡切片 电镜超薄切片 * 石蜡切片制作过程总体上可概括为9个步骤： 取材 固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 切片 染色 封固 形态学石蜡切片制作技术 * 标本取材 实验动物的处死方法 麻醉方法：吸入麻醉、注射麻醉 空气栓塞法 断头法 其它：断髓、股动脉放血法、脊髓捣毁法 * 材料的选择 狗：嗅粘膜 猫：肠系膜、足掌——环层小体 兔：肾、叶状乳头——舌 豚鼠：内耳 结缔组织铺片：大、小白鼠 间皮、内皮：青蛙 猪：肝小叶 牛、羊：心壁 标本取材 * 标本取材 取材的注意事项 离体或机体死亡大于两小时以上内部出现部分自溶，要求标本取材迅速 标本结构的完整性、方向性 根据动物死后组织改变快慢而定，先取胰腺、消化道 肝、脾、肾不要破坏被膜 眼球、睾丸、舌要整体固定 严禁机械损伤：镊子夹过、手压过不可使用 消化管取材：小肠要纵切、食道要横切 神经、动静脉、输精管、输卵管应固定在玻棒上 取材大小：3-4毫米 取消化道的动物应头天禁食 使用锐利的刀片 * 标本固定 固定是指从人体或动物体内取下的标本材料立即浸泡在化学试剂中，借助化学试剂的作用，将组织细胞形态结构保存起来，使其不改变形态结构或变质的一种手段。 * 固定方式 蒸气固定 灌注固定 标本固定 涂片固定 微波固定 标本固定 影响固定的因素 固定温度 标本大小 容积率 固定剂的穿透力 固定时间 PH值 * 常用固定剂的优缺点 标本固定 甲醛 渗透性较强，固定均匀，增加组织的韧性 毒性大，致癌 酒精 兼有脱水作用，无需洗涤 使组织收缩 升汞 (氧化汞) 作用迅速，胞浆着色鲜艳 穿透力小，剧毒 重铬酸钾 强氧化剂 渗透力弱，有毒 苦味酸 防止过度硬化，增强染色能力 渗透力弱，易使组织收缩，易爆炸 锇酸 强氧化剂，植物制片最好的固定剂 昂贵，渗透力弱，不均匀 冰醋酸 抗细胞收缩，渗透性强 使胶原纤维肿胀，不能单独使用 * 固定后的处理 组织的洗涤 脱水：组织内含有较多的水分，必须除尽组织内的水分，以利于透明、浸蜡及包埋。 透明：利用有些有机溶剂既能与脱水剂混合，又能与石蜡液相融合的特性，来置换标本 内脱水剂为浸蜡做准备的过程。 浸蜡：透明后的标本投入到温度适宜的熔化的石蜡内，置换出标本内透明剂的过程。 包埋 修块 切片 展片与粘片 * 染色 整体染色 标本块染色 切片染色 活体染色 金属浸染法 常见染色方法 * 免疫组织化学技术是以免疫学的抗原抗体反应为理论基础，用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内的相应抗原（或抗体）进行定性、定位、半定量检测，经组织化学的显色反应，利用显微镜进行实验结果观察的技术。 其优点是1.高度特异性2.敏感性高3.方法步骤统一 4.形态、功能和代谢密切结合。 免疫组织化学技术 * 主要步骤及注意事项: 一、脱蜡与水合 二、缓冲液洗涤 三、封闭内源性过氧化物酶：3%过氧化氢 四、抗原修复：暴露被封闭的抗原决定簇 免疫组织化学技术 * 谢谢 * 精品文档