体内药物分析培训课件.ppt

头发样品的采集：采集枕部发样(带根部），微量元素在前额部位的头发中含量最低，枕部含量最高。 头发样品的洗涤：除去外源性污染物，推荐使用丙酮-水-丙酮；丙酮浸泡搅拌10min，自来水漂洗3次，再用丙酮浸泡搅拌，自来水、蒸馏水各洗3次。 头发样品的处理：直接甲醇提取、酸水解、碱水解、酶水解（葡萄糖醛酸酶） 精品 三、体内样品的贮存与处理 （一）冷藏与冷冻 血浆和血清需采集后及时分离，一般最迟不超过2h，分离后再置冰箱或冷冻柜中保存（-20~-80℃）。 尿样应立即测定，若收集24h的尿液不能立即测定时，可加入甲苯、氯仿、醋酸等防腐剂，一般可保存24~36h，也可加入叠氮化钠较长时间保存。 唾液在保存过程中会放出二氧化碳使pH值升高。另唾液中含有粘蛋白，须离心后冷藏或冷冻 （二）去活性 终止酶的活性方法：快速冷冻、微波照射、加入酶活性阻断剂等。 精品 分析方法与样品处理步骤的选择 第二节、体内样品的的前处理 精品 一、体内样品预处理的目的 1、使药物从缀合物及结合物中释放出来，以测定药物的总浓度。 2、介质复杂，干扰物多，待测物浓度低，须分离干扰物质、富集待测药毒物 3、为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度 4、为了防止分析仪器的污染、劣化，提高检测准确度、精密度和选择性等。 精品 二、常用体内样品预处理方法 要考虑：药物的理化性质（极性、酸碱性、光谱特性、挥发性、稳定性），药物测定的目的，选用的生物体液和组织的类型，待测物的浓度范围，样品制备与分析技术的关系。 精品 （一）、去除蛋白质 是测定血浆、血清、全血及组织匀浆等样品中药物时的最先处理步骤。 1、加入可与水混溶的有机溶剂（体积比、pH值） 破坏蛋白质分子内及分子间的氢键。常加入乙腈、甲醇、乙醇等，能使与蛋白结合状态的药物释放，将混合物超速离心，取上清液作为样品。 精品 2、加入中性盐 使蛋白脱水而沉淀，硫酸铵最常用 3、加入强酸 与蛋白形成沉淀，阴离子型沉淀剂。如三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸等，在酸性下分解的药物不宜用本法去蛋白。 4、热凝固法 加热至90℃蛋白热变性后离心或过滤除去 精品 精品 （二）分离、纯化与浓集 当药物浓度较低或分析方法的特异性或灵敏度不够高时，生物样品需分离、纯化与浓集。 精品 1、液相萃取法 溶剂选择—合适的溶剂是成功的主要条件 ①了解药物与溶剂的化学结构及其性质 ②对药物未电离分子可溶，对电离形式分子不溶 ③沸点低、易挥发，毒性小与水不相混溶 ④不影响紫外检测 ⑤具有较高的化学稳定性和惰性 ⑥不易乳化 精品 化合物名称 极性 粘度 沸点 吸收波长 Hexane(正己烷) 0.06 0.33 69 210 Cyclohexane(环己烷) 0.1 1 81 210 Toluene(甲苯) 2.4 0.59 111 285 Ethyl ether(乙醚) 2.9 0.23 35 220 Methylene chloride(二氯甲烷) 3.4 0.44 40 245 Ethyl acetate（乙酸乙酯） 4.30 0.45 77 260 Chloroform(氯仿) 4.4 0.57 61 245 精品 提取溶剂：极性相似相溶 溶剂的用量：一般有机相与水相之比为1：1~5：1 溶液的pH调节：最佳pH选择主要与药物的pKa值有关。酸性药物pH应低于药物pKa值1~2个单位；碱性药物：pH应高于药物pKa值1~2个单位。 提取：进行一次（至多二次）提取， 浓集：常用吹氮气使溶剂挥散，或减压蒸发（注意暴沸）。 精品 生物样品宜在碱性或近中性提取，生物基质中内源性物质多为酸性，在碱性下不易被萃取出来。 空白血清在pH2、pH7和pH13三种缓冲液中用乙醚提取，提取液HPLC(220nm)测定，在pH13下提取液中杂质峰最少。 精品 液液萃取特点： 优点：可将大部分内源性杂质去除；经济实用、可使样品富集、可一次进行多个样品萃取 缺点：乳化、污染环境、 乳化的去除：加少量固体氯化钠到水相中可减轻乳化；轻微乳化离心；严重乳化低温冰箱快速冷冻破坏乳化层后融化离心。 精品 2、固相萃取法： 以固相分离方法进行样品预处理，从水相中分离出所需测定的组份，通常以柱分离方式进行操作，故有时这种方法又称为固相提取 活化?上样?淋洗?洗脱 洗脱液浓集 精品 精品 固相萃取的模式及原理 反相固相萃取 正相固相萃取 离子交换固相萃取 ① 阴离子交换 ② 阳离子交换 精品 实验步骤 第一步：用甲醇润湿小柱，活化填料 第二步：用水或适当