DNA的结构与功能.pptVIP

2. DNA-蛋白质印记杂交 主要用于调控蛋白与DNA调控元件相互作用的研究, 是根据位点特异性DNA结合蛋白借助于氢键、离子键和疏水键与同位素标记的特异DNA序列探针结合, 通过放射自显影体系对DNA结合蛋白进行定性、定量及对基因组DNA结合序列进行定位分析的一种方法。 特点： 可以鉴定有无序列特异性DNA结合蛋白； 检测蛋白质纯化过程中的DNA结合活性，及结合序列的定位； 可以确定DNA结合蛋白的分子量。 * 3. 凝胶阻滞电泳 原理： 在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA朝正电极移动的距离是同其分子量的对数成反比，如果DNA分子结合上一种蛋白质，那么由于分子量加大在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞，朝正电极移动的距离也就相应缩短了。所以当特定的DNA片段同细胞提取物混合之后，若其在凝胶电泳中的移动距离变小了，这就说明它已同提取物中的某种特殊蛋白质分子发生了结合作用。 * 4. DNase1足迹法 首先将待测双链DNA片段中一条单链的一端选择性地进行末端标记, 然后加入恰当浓度的DNase1, 使在DNA链上随机形成缺口, 经变性后进行电泳分离,放射自显影, 即可形成以相差一个核苷酸为梯度的DNA条带。 但当DNA片段与相应的序列特异性DNA结合蛋白结合后, DNA结合蛋白可保护相应的DNA序列不受DNase1的攻击, 因而在放射自显影图谱上 DNA梯度条带在相应于DNA结合蛋白的结合区中断, 从而形成一空白区, 恰似蛋白质在DNA上留下的足迹, 因此形象地称作足迹法。如果同时进行DNA化学测序, 即可判断出结合区的精确顺序。 * 5. DNA与蛋白质复合体的电镜观察 借助于电子显微镜, 可以观察到DNA复制, 重组和转录等过程中的DNA一蛋白质复合体的活体状态。 利用电子显微镜进行DNA一蛋白质复合体的观察包括以下三个步骤： 复合体的形成； 未被DNA结合的蛋白质的去除； 电子显微镜供试材料的制备。 * * * For various reasons, including the costs of manufacturing, aspect of practicability and the potential of biological risks, researchers have focused on constructing and optimizing synthetic alternatives to viruses as nucleic acid shuttles. 组成核酸的基本单元－核苷酸 1 核酸的一级和二级结构 2 核酸的高级结构 3 4 DNA与蛋白质的相互作用 * 一、基本单元——核苷酸 1、核苷酸的结构： ①三部分：碱基＋戊糖＋磷酸； ②碱基通过N－糖苷键与戊糖第一位碳原子（C1）相连； ③磷酸基团通过磷酯键与戊糖第五位碳原子（C5）相连。 * 嘌呤 嘧啶 2、两种核糖： 3、五种碱基： * 二、核酸的一级结构和二级结构 1、核苷酸的共价结构，也即核酸的一级结构，是指核酸的核苷酸序列。其结构特点是： ①3’,5’-磷酸二酯键； ②5’端磷酸基团尾， 3’端羟基尾； ③无分支； 2、核酸可被酸、碱和酶水解。 核酸水解产生各种寡核苷酸、核苷酸、核苷和碱基。 * 2、核酸的二级结构，是由碱基对氢键维系的结构。 Watson 和Crick于1953年提出DNA双螺旋结构模型 ①反向平行缠绕，均为右手螺旋； ②嘌呤与嘧啶位于内侧。磷酸与核糖位于外侧，通过3’，5’磷酸二酯键，形成DNA的骨架； ③一条大沟和一条小沟； ④双螺旋直径为2nm，相邻碱基对距离为0.34nm，每一周有10个核苷酸，螺距为3.4nm； ⑤碱基对氢键维系，A＝T，G C。 （一）DNA的waston－Crick结构模型特征： * （二）碱基对配对特征： G C比A＝T 更稳定。 * A型 B型 Z型 外形 粗短 适中 细长 螺旋方向 右手 右手 左手 轴与碱基对的倾角 不穿过 穿过 穿过 碱基对 碱基对 碱基对 大沟 很狭， 很宽， 平坦 很深 较深 小沟 很宽、 狭、深 较狭、 浅