扩张型心肌病的全基因表达谱分析及细胞骨架蛋白研究-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

博J：gF究生毕业论文：扩张型心帆帆的伞坫㈨表丛}片分忻嚏钏啦什架生[』研究第一部分：扩张型心肌病的全基因表达谱分析 博J：gF究生毕业论文：扩张型心帆帆的伞坫㈨表丛}片分忻嚏钏啦什架生[』研究 第一部分：扩张型心肌病的全基因表达谱分析 摘要 研究背景二近{fj永往临床』．发现扩IK弘[．、叭惦(DCM)何群聚现象，提，Ji 弦殳病俘花彳『‘显葺的遗传学基础，以下垃源』众多挂W表达紊乱的结泉。1随符 微阼列分忻(基因芯片)技术的出现，可以从多角度对具体病例的基因特自I逊 f于分析。但口自口在基于心血管病领域的基斟芯片岍究方面却报道不多。因此， 进行DCM基因差异表达方面研究，对系统、彻底地阐述DCM心力衰竭中基因 的表达币[n周节，识别新的Es’Is(已表达基队I序列)，深入认谚!致命性心力衰竭 发7L的分子遗传学途径至关重要。 研究目的：本研究从基因组学的展望而苦，旨在借助于现代基因芯片技术 对OCM做大规模基因表达谱分析，探讨DCM的仝基因表达改变(差异表达)， 以期为了解DCM的发生和发展、寻找与发痫有关或直接致病的新基因提供新 的框架，并可为进一步研究复杂心血管疾病的遗传学基础提供理论依据。 材料和方法：应用基因：芭=片(cDNA Microarray)技术，对刖患DCM接受 心脏移植的住院患者6例冰冻心肌标本(S1．s6)和正常对照者2例冰冻心肌标 本(N1．N2)进行全基因表达谱分析，并筛选2倍差异表达基因，而且着重分 忻了DCM细胞骨架蛋白相关基因的异常表达情况。基因芯片含有相当于5832 个已知基因的14，000个cDNA克隆，[b上海中科丌瑞基因有限公司提供。其中 包括原癌基因和抑癌基因、离子通道运输、细胞周期、细胞骨架运动、细胞凋 C：、应激、DNA合成修复重组、DNA结合转录、细胞受体、免疫相关、信号 传导传递、代谢相关、蛋白翻译合成、发育与分化等相关基因。 结 果：芯片实验过程正常，芯片各项实验数掘通过质检。差异表达基㈥ 分昕结果显示，共发现有52个为共同差异表达基冈，均为表达上调基因。其r|】 5个为ESTs，4个为新的cDNA克隆。经检索GeneBank和PubMed (http：／／www．ncbi，nlm．nih．gov／)，52个差异表达基因大致分为如卜几个功能类 【．j】j：(1)线粒体能量代谢有关的基因：(2)细胞骨架与运动蛋白基因：(3)细 fj乜代谢相关基因：(4)蛋白质合成或表达相关的基因：(5)ESTs或新的eDNA 觅隆：(6)其它相关基因(如信号传导与离子通道、免疫、发育与分化)。对细 魁骨架蚩白相关基因的差异表达分析显示有4个共同的差异基因，分别为叽球 H孳，I。研究生毕业论文：{r H孳，I。研究生毕业论文：{r 0k型心Jlll．hq的辛牡 表达L碍分晰技圳胞什禁盘Cjl{Jf究 受【!I轻链多肽谰宵基因、叭动拦自结合篮fi LIM．I、FERM(RhoGEF and pleckstrin domain protein 1)及cofilin—l基因，均为表达』‘凋苍因。在分缓(S1．$4／N2及 s5+S6／N1)差并表达分析r；tj≮发现有57个与细盱鲢骨架及运动蛋自艉|天的劳并表 达氍f嗣，色捅|。潲基因31个、下调鞲困：4个、同一基因番}{舀分餐l表土叁{．调 或IV调的彘‘2个t彬l动受白结合羞自I．IM．1、A，＼664212)。其；礼与；12t帆细跑 盼裟蛋白殷运动蛋白明确桂i关的其它麓并基{冀迓再￡．sarcoglycan t F溺)、垮I动 蚤舟榴关爱f}2／3复合物受荤像lA(F调)弓疆9皇缒2(上渊)、垮l球蛋自$≠链 2(F‘调)、波形蛋自土灞)、徽管蛋白(L调)、myomesin(￡稍)等。 结论： (1)DCM衰竭心肌与弧掌心飘之阉存在多种差异表达基因，且 均为表达上谣基因。它们涉及缨腿骨架段运动、细敷周期、离子转运、应激、 DN，、合成修复或续合转录、缨匏受体、免疫、信号传递、代泌、蛋白质合成、 发专与分化等相关基因，提示多基因表达素乱参与了DCM的发生和演变过程。 (2)DCM衰竭心肌除有细胞骨架蛋白辏困的上调表达外，还有收缩蛋白 基凼(胍球蛋白轻链多肽调节基因)上调表达，细胞骨架蛋白尤其是与actin相 关性细胞骨架蛋白的基因表达改变均可能参与了DCM发病和向心力衰竭的演 变。 (3)DCM褒竭心肌发生显著的线粒体酶的基因表达上调，提示在DCM 演变成心力衰竭的过程中存在心肌能量代谢障碍，线粒体功能障碍也可能参与 了心力衰竭的发生和／成显示为一种维持衰竭心肌功能的代偿机制。 (4)DCM衰竭心肌出现ESTs或新的cDNA克隆表达，但是否为疾病相 关基因及其病理，土理意义如何尚有待于进 步验证研究。 荚键词：扩张型心肌病基因芯片差异表达